栀子和黄连解毒汤肝毒性比较探究

栀子和黄连解毒汤肝毒性比较探究

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1、梔子和黄连解毒汤肝毒性比较探究[摘要]目的:观察黄连解毒汤中其他药物与梔子合用对梔子肝毒性的影响及作用机制。方法:大鼠分别灌胃给予梔子及''黄连解毒汤”水煎液,剂量均10倍于临床用量,每天给药1次,3d后测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)o取肝脏,计算肝重指数。测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的含量。TUNEL法测肝组织中细胞凋亡;免疫组化法测肝组织中凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达。结果:梔子

2、组与对照组相比,肝重指数显著增加;ALT,AST,ALP,TBA显著升高;SOD,SOD/MDA及GSH-PX显著降低,MDA,TNF-a含量显著升高;累积吸光度,凋亡指数,Bax,Bax/Bcl-2显著升高。黄连解毒汤组与梔子组相比,肝重指数显著减小;ALT,AST,ALP,TBA显著降低,SOD,SOD/MDA及GSH-PX显著升高,MDA,TNF-a含量显著降低;累积吸光度与凋亡指数显著降低;Bcl-2显著升高,Bax/Bcl-2显著降低。结论:梔子有一定的肝毒性,机制与炎症、氧化应激反应诱导肝细胞的坏死与凋亡有关;黄连解毒汤中除梔子外的其他中药可通过提高清除自

3、由基酶的活性、抑制炎症反应拮抗梔子引起的肝细胞损伤而降低梔子的肝毒性。[关键词]梔子;肝毒性;黄连解毒汤中药及其组方配伍理论是传统中医药理论的重要组成部分,在临床,配伍应用不仅可提高单味药的疗效,还可减少或消除单味药的毒副作用。梔子是临床常用中药之一,具有泻火除烦、清热利湿、凉血散瘀的功效;主要用于热病心烦、急性黄疸型肝炎、膀胱炎、目赤肿痛、上消化道出血、局部出血及扭挫伤的治疗[1]。但有文献报道,大剂量梔子具有明显的肝毒性[2]。黄连解毒汤出自唐•王秦所著《外台秘要》,由黄连、黄柏、黄苓、梔子4味中药组成,为清热解毒的代表方。本课题选择含有梔子的黄连解毒汤与等量梔子

4、单用的肝毒性进行比较研究,结合梔子肝毒性机制分析黄连解毒汤中其他药物与梔子合用对梔子肝毒性的影响及作用机制,为临床安全用药提供参考。1材料1.1药材生梔子,批号110816,产地浙江;黄连,批号111027,产地四川;黄柏,批号111114,产地四川;黄苓,批号120110,产地内蒙古。以上药材均购自上海养和堂中药饮片有限公司。1.2制备方法梔子及黄连解毒汤组方药材分别置于不锈钢锅中,加8〜10倍量的蒸馆水,浸泡过夜,加热煮沸,沸腾后改用文火,保持微沸30min,搅拌,趁热过滤,药渣再加蒸馆水同法煎煮,沸后30min,滤过,合并滤液,浓缩,使用前用蒸馆水稀释调整至所需

5、浓度。1.3动物Wistar大鼠,雄性,中国科学院实验动物有限公司提供,合格证号SCXK(沪)2007-2005,饲养于上海中医药大学实验动物中心。1.4试剂超氧化物歧化酶(S0D)、丙二醛(MDA)、考马斯亮蓝、谷胱甘肽氧化酶(GSH-PX)等检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所;肿瘤坏死因子(TNF-a)购于上海西唐生物科技有限公司;凋亡检测试剂盒,FragELTMDNAFragmentationDetectionKit,Colorimetric-TdTEnzyme购于Merck公司;免疫组化一抗:兔多克隆抗体Bax,兔多克隆抗体Bcl-2购自天津津脉基因有限公司

6、;免疫组化二抗:HRP标记羊抗兔购自福州迈新生物技术开发有限公司。2方法2.1动物分组及给药Wistar大鼠,体重(140土10)g,预适应5d后,分为3组,每组10只,分别为正常对照组、梔子组(9g・kg-l)、黄连解毒汤组。梔子为临床用药等效量的10倍,黄连解毒汤中所含梔子与单用梔子的量相同,其他各药量均相应扩大为临床用药等效量的10倍。每天灌胃给予受试药或对照液1次,连续3d。2.2指标的检测给予受试药或对照液连续3d后动物取血,制备血清,测定ALT,AST,ALP,TBA;肝称重后取肝大叶,10%福尔马林固定;其余肝组织保存在超低温冰箱中。测定前取超低温冰箱冻

7、存的肝组织加冷生理盐水制备成肝匀浆,离心,取上清液备用。取0.5%肝组织匀浆按照试剂盒说明,用考马斯亮蓝方法测定肝组织中蛋白含量及肝组织中S0D活性,取1%肝组织匀浆测定肝组织中MDA含量,计算SOD/MDA;取1.5%肝组织匀浆测定肝组织中GSH-PX活性。取10%肝组织匀浆采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测TNF-a浓度,具体操作按试剂盒说明进行。肝组织匀浆中TNF-a浓度以单位蛋白含量表示。取10%福尔马林固定的肝组织常规脱水包埋,切片。TUNEL染色法检测细胞凋亡:石蜡切片脱蜡水化后,蛋白酶K工作液(20mg・L-1)室温孵育20min。

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