荆芥挥发油与主要成分抗流感病毒作用及其机制研究

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1、学位论文指导教师姓名:萱直!塾握2’申请学位级别:亟±专业名称:.药堡堂论文提交时间:2Q12生§旦!Q旦论文答辩时间:2Q12生§月圣Q目二O一二年五月国家自然科学基金(30973923)、国家人社部2010年度高层次留学人才回国资助人选项目资助目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯..:;英文略缩词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1.1动物、鸡胚、病毒株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1.2药物及试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1.3主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.

3、2方法与结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92.2.1荆芥挥发油的提取与化学成分分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92.2.2荆芥挥发油及其主要成分抗流感病毒作用药效学研究⋯⋯⋯⋯⋯..112.2.2.1药物对流感病毒在鸡胚内增殖的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112.2.2.1.1病毒的增殖及其对鸡胚的半数感染量(EID50)测定⋯⋯⋯112.2.2.1.2药物对鸡胚的毒性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。112.2.2.1.3药物在鸡胚内的抗流感病毒作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.162.

4、2.2.2药物对病毒性肺炎模型小鼠的抗流感病毒作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l2.2.2.2.1流感病毒对小鼠的LD50测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212.2.2.2.2药物对小鼠的LD50测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯222.2.2.2.3药物对病毒性肺炎模型小鼠的死亡保护作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯.242.2.2.2.4药物对病毒性肺炎模型小鼠肺指数的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.262.2.2.2.5药物对病毒性肺炎模型小鼠肺组织病毒滴度的影响⋯⋯⋯.282.2.2.2.6药物对病毒性肺炎模型小鼠肺组织病理形态学的影响⋯⋯.

5、302.2.3基于病毒性肺炎模型小鼠药物抗流感病毒作用机制研究⋯⋯⋯⋯..322.2.3.1病毒性肺炎模型小鼠血清细胞因子IFN.a、IFN.B、IL.2、IL.6及TNF.a含量测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322.2.4统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.363讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.363.1病毒性肺炎模型及造模实验方法的选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.363.2荆芥挥发油及其主要成分的抗流感病毒作用

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.383.3荆芥挥发油及其主要成分的抗流感病毒作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.394结{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.415问题与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..45致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.49文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..50在读期间公开发表的学术论文、

7、专著及科研成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57申明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58中文摘要目的:研究荆芥挥发油及其主要成分薄荷酮与胡薄荷酮的抗流感病毒作用,通过测定病毒感染后小鼠血清相关细胞因子的分泌水平来初步揭示药物抗流感病毒的作用机制,以其阐释解表药“辛散解表”性效的科学内涵,并为辛温解表药“辛散外邪”的内在规律提供一定参考。方法:采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/PR/8/34感染鸡胚和造成小鼠病毒性肺炎模型的实验方法。①鸡胚法药物抗流感病毒作用:分

8、别以预防(鸡胚感染病毒前1h给药)和治疗(鸡胚染毒后1h给药)两种给药方案,经鸡胚尿囊腔和卵黄囊两种给药途径将不同浓度的药物注入鸡胚,孵育72h后收取鸡胚尿囊液进行血凝试验来评价药物在鸡胚内的抗流感病毒作用。②小鼠体内实验法药物抗流感病毒作用:分别以预防(小鼠感染病毒前5d开始给药,连续5d)和治疗(小鼠感染病毒后当天开始给药,连续5d)两种给药方案,观察药物对病毒感染小鼠的死亡保护率、肺指数、肺组织病毒滴度以及

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1、学位论文指导教师姓名:萱直!塾握2’申请学位级别:亟±专业名称:.药堡堂论文提交时间:2Q12生§旦!Q旦论文答辩时间:2Q12生§月圣Q目二O一二年五月国家自然科学基金(30973923)、国家人社部2010年度高层次留学人才回国资助人选项目资助目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯..:;英文略缩词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1.1动物、鸡胚、病毒株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1.2药物及试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1.3主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.

3、2方法与结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92.2.1荆芥挥发油的提取与化学成分分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92.2.2荆芥挥发油及其主要成分抗流感病毒作用药效学研究⋯⋯⋯⋯⋯..112.2.2.1药物对流感病毒在鸡胚内增殖的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112.2.2.1.1病毒的增殖及其对鸡胚的半数感染量(EID50)测定⋯⋯⋯112.2.2.1.2药物对鸡胚的毒性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。112.2.2.1.3药物在鸡胚内的抗流感病毒作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.162.

4、2.2.2药物对病毒性肺炎模型小鼠的抗流感病毒作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l2.2.2.2.1流感病毒对小鼠的LD50测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212.2.2.2.2药物对小鼠的LD50测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯222.2.2.2.3药物对病毒性肺炎模型小鼠的死亡保护作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯.242.2.2.2.4药物对病毒性肺炎模型小鼠肺指数的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.262.2.2.2.5药物对病毒性肺炎模型小鼠肺组织病毒滴度的影响⋯⋯⋯.282.2.2.2.6药物对病毒性肺炎模型小鼠肺组织病理形态学的影响⋯⋯.

5、302.2.3基于病毒性肺炎模型小鼠药物抗流感病毒作用机制研究⋯⋯⋯⋯..322.2.3.1病毒性肺炎模型小鼠血清细胞因子IFN.a、IFN.B、IL.2、IL.6及TNF.a含量测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322.2.4统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.363讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.363.1病毒性肺炎模型及造模实验方法的选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.363.2荆芥挥发油及其主要成分的抗流感病毒作用

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.383.3荆芥挥发油及其主要成分的抗流感病毒作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.394结{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.415问题与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..45致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.49文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..50在读期间公开发表的学术论文、

7、专著及科研成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57申明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58中文摘要目的:研究荆芥挥发油及其主要成分薄荷酮与胡薄荷酮的抗流感病毒作用,通过测定病毒感染后小鼠血清相关细胞因子的分泌水平来初步揭示药物抗流感病毒的作用机制,以其阐释解表药“辛散解表”性效的科学内涵,并为辛温解表药“辛散外邪”的内在规律提供一定参考。方法:采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/PR/8/34感染鸡胚和造成小鼠病毒性肺炎模型的实验方法。①鸡胚法药物抗流感病毒作用:分

8、别以预防(鸡胚感染病毒前1h给药)和治疗(鸡胚染毒后1h给药)两种给药方案,经鸡胚尿囊腔和卵黄囊两种给药途径将不同浓度的药物注入鸡胚,孵育72h后收取鸡胚尿囊液进行血凝试验来评价药物在鸡胚内的抗流感病毒作用。②小鼠体内实验法药物抗流感病毒作用:分别以预防(小鼠感染病毒前5d开始给药,连续5d)和治疗(小鼠感染病毒后当天开始给药,连续5d)两种给药方案,观察药物对病毒感染小鼠的死亡保护率、肺指数、肺组织病毒滴度以及

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