青天葵抗甲、乙型流感病毒作用研究

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1、青天葵抗甲、乙型流感病毒作用研究【摘要】　　目的研究青天葵在体外抗甲、乙型流感病毒株作用。方法选用狗肾细胞培养法考察青天葵不同极性部位对甲型、乙型流感病毒的作用。结果青天葵水溶性部位对甲型流感病毒FM1有抑制作用。结论青天葵具有体外抗甲型流感病毒作用。【关键词】青天葵甲型流感病毒乙型流感病毒抗病毒Abstract:ObjectiveAntiviralactionsofNerviliafordiiagainstinfluenzavirusinvitrowerestudied.MethodsCellculturetechnologywasusedinMDCK

2、cellstoobserveantiviralactionofabstractsofNerviliafordiiagainstinfluenzavirusAandB.ResultsWatersolublepartofNerviliafordiicaninhibittheproliferationofinfluenzavirusAinMDCKfordiiiseffectiveagainstinfluenzavirusAinvitro.Keywords:Nerviliafordii;InfluenzavirusFM1strain;Influenzavirus

3、0Bstrain;Antiviralaction青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nerviliafordii(Hance)Schitr.，以全草或块茎入药，性平，味苦、甘。有清肺止咳，健脾消积，镇静止痛，清热解毒、散结消疬之功效，主治肺痨、咳嗽咳血、瘰疬、肿毒、跌打损伤、小儿疳积、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等［1］。目前青天葵的研究多集中在栽培、组织培养等方面，其药效学方面的研究报道较少。本实验对青天葵的抗流感病毒作用进行观察，现报告如下。1材料药物青天葵药材购自广东致信药业有限公司，经谭树辉鉴定为兰科植物青天葵Nerviliafordii(Hance)Schi

4、tr.。药材用乙醇渗漉，渗漉液浓缩成浓稠浸膏，加蒸馏水转溶，水液加石油醚萃取至石油醚层无色，石油醚层弃去。水层用氯仿萃取，至氯仿层无色，合并氯仿萃取液，浓缩得氯仿部位；水层用醋酸乙酯萃取，至醋酸乙酯层无色，合并醋酸乙酯萃取液，浓缩得醋酸乙酯部位；水层用正丁醇萃取，至正丁醇层无色，合并正丁醇萃取液，浓缩得正丁醇部位；余下的水层部位；采用水蒸汽蒸馏法提取得到挥发油部位。阳性对照药病毒唑，批号0301006，由湖北医药工业研究院提供。毒种甲型流感病毒FM1株、乙型流感病毒昆40B株由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及鸡红血球

5、血凝法判断滴度，在37℃，体积分数为5%CO2孵箱中培养。狗肾细胞由广东省防疫站赠送，广州中医药大学热带病研究所传代保存。细胞培养液和维持液细胞培养液和维持液各为含体积分数为10%、2%的小牛血清、100kU/L青霉素、链霉素的DMEM。方法与结果按照《中药新药研制开发技术与方法》［2］上的要求进行。测定病毒的半数致细胞病变量，抗病毒试验在96孔微量板上进行，每孔ml，细胞数为1×105个/ml，长成单层后，将青天葵提取物用维持液稀释成4个不同浓度，弃去原培养液后将不同浓度样品加入细胞孔中，每孔ml，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞无毒界限。同

6、时在MDCK细胞上测定攻击病毒TCID50。实验时设病毒对照组、正常对照组、药物毒性组及阳性对照组。置37℃，体积分数5%CO2孵箱中培养。每天倒置显微镜下观察病变并记录，观察d终止。实验结果见表1。表1青天葵不同极性部位对甲、乙型流感病毒的抑制作用由表1可知，阳性对照药物病毒唑亚毒性浓度100μg/ml可以抑制FM1病毒、昆40B病毒。青天葵水层部位浓度为50mg/ml时，对甲型流感病毒FM1有抑制作用，其作用强度与病毒唑相同，其他部位对甲型流感病毒均无抑制作用，青天葵5种提取部位对乙型流感病毒昆40B均无抑制作用。讨论病毒是最小的生物病原体,不具有细

7、胞结构,主要由核酸核心和蛋白质外壳构成(称为衣壳)构成。在临床感染疾病中,约85%是由病毒引起的。而且,很多病毒感染的致病率很高,并发症严重［3］。流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,它具有高度的传染性,呈周期性大流行,是危害人类健康的一种重要疾病。研究表明，在呼吸道疾病患者中，小儿的病毒检出率为%，呼吸道合胞病毒占首位，其次是流感病毒；成人为%，流感病毒占首位，可见病毒是上呼吸道感染的主要原因之一［4］。目前国内外用于抗甲型流感病毒的药物有金钢烷胺与甲基金刚烷胺、利巴韦林、病毒唑和干扰素等,但由于流感病毒血凝集素(HA)及神经氨

8、酸酶(NA)经常发生变异以及病毒的耐药等问题,使流感病毒的防治问题仍很严峻。目前