青天葵活性部位的体外抗肿瘤作用研究

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1、青天葵活性部位的体外抗肿瘤作用研究作者：钟振国袁叶飞周燕园甄汉深梁臣艳【摘要】　　目的确定广西特产药材青天葵体外抗肿瘤作用的活性部位。方法青天葵部位提取物的制备主要采用溶剂法,青天葵全草先用95%的乙醇提取，得到的提取物进一步用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、甲醇依次提取，得到极性由小到大的4个提取部位。活性筛选采用MTT法实验，观察青天葵提取物对7种肿瘤细胞的生长抑制作用。结果青天葵石油醚和醋酸乙酯部位具有一定的体外抗肿瘤作用。结论首次确定了青天葵的石油醚和醋酸乙酯部分是体外抗肿瘤作用的有效部位。【关键词】青天葵体外

2、抗肿瘤作用活性部位　　Abstract：ObjectiveTodeterminetheactivefractionNerviliafoadii(Hance)Schltr.MethodsThesamplesether,ethylacetate,n-Butylalcoholandmethanolinturntogetfourfractionsfromsmalltolargeinpolarity.TheMTTexperimentadeforactivescreening.Theinhibitinginfluenceso

3、fextractsfromNerviliafoadii(Hance)Schltr.ongroantumorcellsetherextractandethylacetateextractbothhadsomeanticancereffectsinvitro.ConclusionItisthefirsttimethatthepetroleumetherextractandethylacetateextractofNerviliafoadii(Hance)Schltr.areprovedtobetheeffective

4、anticancerfractionsinvitro.　　Keyl的溶液，置于-20℃冰箱密闭避光保存。临用前用不含血清和抗生素的RPMI1640（NG108-15用DMEM）液稀释至所需浓度，DMSO终浓度在0.01%水平。　　1.2培养液　　1.2.1RPMI完全培养液含RPMI1640培养基（GIBCO）、3%谷氨酰胺、卡那霉素750μg/ml、10%FBS（临用前加）。　　1.2.2DMEM完全培养液含DMEM培养基（GIBCO）、卡那霉素750μg/ml、10%FBS（临用前加）。　　1.3细胞株白血病

5、细胞株L1210和P388D1、宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤细胞株B16、神经肿瘤细胞株NG108-15等均购自上海细胞生物研究所细胞库，人肝癌细胞株Hela7404由广西医科大学药理教研室提供。　　1.4试剂　　MTT（四甲基噻唑蓝）为德国Sigma公司产品，批号020609；FBS（胚胎牛血清）为美国Hyclone公司产品，批号0405；RPMI1640和DMEM培养基为GIBCO公司产品，批号1120708和0311；Trypsin（胰蛋白酶）由天津市灏洋生物制品有限责任公司提

6、供，批号200503；DMSO（二甲基亚砜）由天津汇英化学试剂有限公司提供，批号20040526。　　1.5细胞培养肿瘤细胞用含10%灭活新生小牛血清的RPMI1640（NG108-15肿瘤细胞用DMEM）培养基在37℃，15%CO2条件下培养，取对数生长期细胞用于实验。　　1.6仪器　　ThermoForma型CO2培养箱，美国产；Olympus型倒置显微镜，日本产；Biocell型酶标仪，奥地利产；AG135型电子天平，瑞士产；培养瓶，美国产；3072型96孔板，丹麦产；3001型培养皿，美国产；DLF560

7、型超净工作台，荷兰产；HV-50自动高压灭菌器，日本产。　　2方法　　2.1样品的提取分离　　将青天葵药材阴干，去除杂质，粉碎为粗粉，称取9.0kg药材粗粉，用95%乙醇（食用）浸泡48h后渗滤提取，用10倍量乙醇提取。合并乙醇提取液，减压回收乙醇，得粗提物，干燥后得921.3g（得膏率10.2%）。将所得的粗提物用硅胶拌匀后，依次用石油醚（60～90℃）、醋酸乙酯、正丁醇、甲醇回流提取，回收溶剂，得石油醚部位180g，醋酸乙酯部位87.5g，正丁醇部位86g，甲醇部位50g。　　2.2MTT法　　取对数生长期细

8、胞以0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化后，用培养液稀释。在96孔培养板中每孔加入200μl（含有5000个/ml肿瘤细胞）含10%FBS的RPMI1640培养液，NG108-15细胞则用含10%FBS的DMEM培养液，细胞置37℃，10%CO2培养24h后，实验组分别加入最终浓度为15，30，60，120，240μg/ml提取物的培养液，对照组则加入等体积溶剂的培