甘肃棘豆不同活性部位提取及抗肿瘤作用研究

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1、中文摘要摘要甘肃棘豆(OxytropisKansuensisBunge)是棘豆属有毒植物品种之一，其分布面积广，营养价值高，但毒性也很强，严重威胁着草原畜牧业的发展。目前，棘豆属植物的防除和综合利用研究已取得了显著的成效。但其药用研究不深入也不系统，本试验以筛选甘肃棘豆抗肿瘤活性部位或活性段为目的，为开发甘肃棘豆为新型抗癌中药做了一定的前期研究工作.试验内容主要分为以下三个部分:1.按传统植物化学分离技术将甘肃棘豆水醇提取物分离成四个不同极性部位，即石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酷部位和水相部位;基于对甘肃棘豆同属植物生物碱成分及活性的研究，将甘肃棘豆提取物又分离成生物碱和非生物碱部

2、位，将所得六个部位作为筛选研究对象。2.选取乙酸乙酷部位、水相部位、生物碱和非生物碱部位，按照《全国抗肿瘤药物体内筛选规程》对荷SIB。和H=小鼠进行了体内抗肿瘤实验。初步证明生物碱部位为甘肃棘豆抗肿瘤活性部位。3.为进一步探讨其抑制肿瘤生长机理，本研究在细胞学水平观察甘肃棘豆生物碱阻止SIB。肉瘤细胞恶性表型及直接杀伤肿瘤细胞的作用，在分子生物学水平观察与恶性肿瘤发生发展过程密切相关的PCNA、突变型p53蛋白表达及生物碱的干预作用。试验主要取得了以下结果:1.甘肃棘豆生物碱对SIB。肿瘤细胞具有直接杀伤作用，瘤体切片病理检查可见大面积红染无结构的坏死区，肿瘤细胞明显减少，残存肿

3、瘤细胞大多萎缩，核深染固缩或溶解，也可见个别逆转肿瘤细胞，核明显缩小，周围胞浆红染，核浆比例减小，呈规则的圆或椭圆型。2.免疫组化法检测生物碱对PCNA和突变型p53表达的干预结果:甘肃棘豆生物碱给药组PCNA和p53阳性表达均较阴性对照组低，统计处理差异显著(P0.05).3.各组抑瘤率的比较分析结果:非生物碱部位各剂量组每次试验抑瘤率均小于30%，按抗肿瘤药物体内筛选规程药物疗效评价标准，认定没有抗肿瘤活性;乙酸乙酷部位和水相部位对S、和HYT均有一定抑制作用，但其抑瘤作用都不及生物碱部位强。4.各样品对荷瘤小鼠免疫器官及体重的作用结果:对荷瘤小鼠胸腺、脾脏进行了重量分析，结果

4、表明各样品对荷瘤小鼠胸腺、脾脏没有明显的影响;和对照组相比，体增重率也无统计意义(PLO.05).试验结论:1.走中药研发的技术路线，首次将甘肃棘豆多个成分群进行系统地抗肿瘤试验研ii西北农林科技大学2003届硕士学位论文:甘肃棘豆不同活性部位提取及抗肿瘤作用研究究。2.确认生物碱部位为甘肃棘豆抗肿瘤活性部位。乙酸乙酷部位和水相部位对S,BD和H22均有一定抑制作用，但其抑制作用都不及生物碱部位强，这可能是由于抗肿瘤活性生物碱在这两个极性部位中不同程度分布的原因。因此，以后对甘肃棘豆抗肿瘤活性研究，可直接从生物碱部位着手.3.首次对甘肃棘豆生物碱抗肿瘤作用进行探讨.肿瘤病理切片显微

5、镜观察可见，生物碱可使阮。、H22恶性肿瘤细胞出现大面积坏死.免疫组化结果表明，甘肃棘豆生物碱能有效抑制小鼠S,9。肉瘤生长，此作用与降低PCNA,p53蛋白表达有关。生物碱给药组PCNA表达降低，说明甘肃棘豆生物碱可抑制毓。肿瘤细胞增殖。p53突变在肿瘤发生中起恶性转化功能，甘肃棘豆生物碱抑制肿瘤生长与抑制p53突变有关。4本试验按照《免疫动物筛选规程))中“免疫器宫重量法”对荷瘤小鼠胸腺、脾脏进行了重量分析，结果表明各样品对荷瘤小鼠胸腺、脾脏没有明显的影响;和对照组相比，体增重率也无统计意义。说明各样品试验剂量对小鼠没有毒性反应，也没有提高荷瘤小鼠非特异性免疫功能。至于甘肃棘豆

6、生物碱在直接对肿瘤细胞作用同时，是否可提高机体细胞和体液免疫功能有待进一步研究。[关键词7甘肃棘豆;生物碱;S,.;H22;PCNA;p53;肿瘤英文摘要TheextractionofdifferentpartsfromOxytropiskansuensisandtheresearchofitsanti-tumoreffectMasterCandidateWUDaSupervisorProf.WANGJian-huaProf.SHIYan-pingCollegeofAnimalScienceandVeterinarymedicine,NorthwestSci.-Tech.Unive

7、rsityofAgricultureandForestryYangling,Shaanxi,P.R.CHINAJune,2003ABSTRACT必了tropisKansuensisBungeisoneoftoxicwhincategoryplants,whichdistributesabroad,hashighnutrientvalueandtoxicity,andseriouslythreatensthelocalstockbreadingandcausesmass