盐酸克伦特罗快速检测方法研制与应用

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1、盐酸克伦特罗快速检测方法研制及应用参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36第五章金标免疫层析速测克伦特罗试纸条的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯371试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯372试验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯373结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯404讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44

2、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49摘要盐酸克伦特罗快速检测方法研制及应用摘要为了建立快速、简单、方便的克伦特罗(C1enbuterol，CL)检测方法，本试验采用重氮法将CL与牛血清白蛋白(Bovinesemmam啪in，BSA)、卵清白蛋白(0valbw血。OvA)偶联，产

3、生免疫原CL．BSA，包被抗原CLOVA，以CL．BSA作为免疫原，用等剂量的福氏完全佐剂乳化CL．BSA，免疫6周龄BALB／C小鼠．试验目的：(1)通过制备高效价的CL多克隆抗体，构建克伦特罗酶联免疫吸附检测试剂盒；(2)运用杂交瘤技术，分离CL单克隆抗体，构建克伦特罗胶体金检测试纸条．1、CL酶联吸附检测试剂盒小鼠经CL．BSA多次免疫后，分离小鼠血清，得抗血清效价为128000，与莱克多巴胺(Ractopamine，Rac)、沙丁胺醇(Salbut锄01，Sal)交叉反应率为O．1％，具有很强的特异性．用CL抗血清

4、建立了CL间接竞争ELISA法，得到标准曲线的回归方程10西ty=．O．8756x+1．6958，相关系数为O．995，可检测范围为ln咖L．10肛∥mL，并检测出饲喂了含C端的尿样中含有CL．2、CL胶体会检测试纸条小鼠经CL．BSA加强免疫后3天，取小鼠脾细胞，利用聚乙二醇(PEG)4000将其与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，制备杂交瘤细胞．经过对培养上清的筛选和杂交瘤细胞的克隆化，最终得到3株能分泌克伦特罗抗体的杂交瘤细胞株：1A1、185、和2H9．用间接ELISA法测得杂交瘤培养上清效价分别达到1：2000、1：

5、1200、1：800．最后用扩大培养所得的杂交瘤细胞诱导小鼠产生产生腹水，制备单克隆抗体．CL检测试纸条的研制：本试验利用CL单抗标记40nm胶体金，标记胶体金稳定。将标记胶体金、CL．OVA和羊抗鼠免疫球蛋白dIgG)喷涂在硝酸纤维膜(NC)膜上，CL．OVA条带作为检测线，羊抗鼠IgG条带作为质控线，制备得到可快速检测盐酸克伦特罗的胶体金检测试纸条．将待测样品滴在试纸条吸样品区，在毛细管作用下，样品沿着膜移动。根据竞争抑制免疫层析原理，如果样品中没有CL，质控线和检测线均显色；相反，检测线不显色，质控线显色．该法可在1

6、0分钟内完成对CL的检测，最小检测限为1ppb。该检测方-法．陕速、准确、灵敏、操作简便，适合非专业人员在屠宰现场检测克伦特罗。关键词：克伦特罗；ELIsA；单克隆抗体；胶体金试纸条、ABSTRACTMETHODSFORCLENBUTEROLRAPIDDETECTIoNhlordcrtoestablisharapid，siInpleandconVenientmetllodofdetectingclellbuterol，CL—co坞ugatedantigenwereproducedbycouplingdjazotizedCL

7、叭廿lBovineSeraAlbumin(BSA)andOvalbumiIl(OVA)．ThusgetimmunogenCL-BSAaIldantigen-coatedCL-OVA，usingCL—BSAaSaimm蚰ogeIl讯thequaldoseofFremld’scompleteadjuVaIltemulsifiedtoimm加e6一week—oldBALB／Cmice．Thusto(1)buildC1enbuter01ELISATestKitby11ightiterpolyclonal趾tibodies，(2)b

8、uildClenbuterDlcolloidal901dtestdipstickbymonoclonalantibodyCL．1．CLELISAAssavKitSeparated趾ti—C1e11bmerolsen珊merr印eatedimmumzationofCI广BSA，a11d也eaveraget