米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后caspase-12表达影响的实验分析

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1、学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书：2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：滂避

2、日期：!翌年二二月二三日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)羹喜耋嘉萎耋!盗指导教师签名：窒：2望!生日期：兰型年—三一月』三日日期：兰翌年—三一月』L日(本声明的版权归山西医科大学所有，未

3、经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)．^_‘．-J--月lJ舌脑血管病的患病率、复发率、致残率、死亡率很高，是导致人口死亡的三大疾病之一。我国许多城市，脑血管病在人口死因中已居首位，且发病年龄趋向于年轻化。其中缺血性脑血管病(ICVD)发病率最高，约占全部脑卒中的80％。现代医学研究认为，脑缺血再灌注损伤(CIRI)是缺血性脑血管疾病的主要病理生理过程【l】。脑缺血再灌注早期，缺血中心区以坏死为主，缺血半暗带、海马CAl区神经元[el以凋亡为主。凋亡是可逆过程，因此对凋亡机制的研究具有重要意义，阻断缺血神经元凋亡从而逆转神经元损伤成为缺血性脑血管疾病的治疗焦点。

4、近年来研究发现，缺血再灌注导致的缺血缺氧、葡萄糖／营养物质缺乏、酸中毒、ATP耗竭、自由基蓄积、Ca2+稳态破坏、二硫键形成抑制等均可引起内质网功能障碍，出现错误折叠与未折叠蛋白在腔内聚集，触发内质网应激(ERSV31。一定程度的内质网应激因能激活分子伴侣而保护细胞，相反，应激过强时，保护机制不能与损伤抗衡，通过Caspase．12独立地导致细胞凋亡[41进一步加重缺血再灌注损伤，形成恶性循环。Caspase．12是半胱天冬酶亚家族成员，存在内质网膜上，是内质网应激导致凋亡的特异性介质【5】。脑缺血再灌注损伤触发内质网应激后，激活Caspase．12，触发Caspa

5、se联级反应，启动DNA降解，导致细胞凋亡【6】。Mehmett7】研究发现Caspase．12基因敲除小鼠模型无明显发育异常或行为缺陷，肿瘤发生率及发育过程中各种生理所需凋亡均正常，推测Caspase．12可能对正常发育或肿瘤形成并不重要，因此Caspase．12是较理想的抗凋亡治疗靶标。‘米诺环素(Minocycline)是第二代半合成的四环素类抗生素，是一种相对分子量为450000的高亲脂型小分子物质，可有效通过血脑屏障【8】，主要运用于感染的治疗。近年研究发现，米诺环素在多种神经疾病模型或疾病(脑缺血【9，101、脊髓损伤【111、帕金森病【12】、阿尔茨海

6、默病【13】、亨廷顿病【14】、肌萎缩侧索硬化症【151、多发性硬化㈣)中均有神经保护作用。其机制主要有：阻断神经胶质细胞的激活【91，抑制细胞凋亡【lo】，减少钙离子聚集【111，抑制基质金属蛋白酶【161(M^但s)分泌，抑制自由基释放【17】，抑制中性粒细胞活性‘18】等。米诺环素在脑缺血中的神经保护作用机制尚待阐明。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，探讨米诺环素对Caspase．12以及神经元凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制，为米诺环素应用于缺血性脑卒中提供基础实验依据。山西医科大学硕士学位论文第一部分材料和方法1．1材料1．1．1主要仪器及试剂米诺环

7、素TTC多聚甲醛兔抗鼠Caspase．12多克隆抗体PV．6001试剂盒TUNEL试剂盒蛋白酶KTween20卡轮转切片机生物组织包埋机数显恒温培养箱图像分析仪，光学显微镜分析天平超声波细胞粉碎机离心机PCR仪凝胶电泳仪紫外分光光度仪凝胶成像图像分析系统SigmaAmresco天津傲然精细化工研究所北京博奥森生物技术有限公司北京中杉金桥生物技术有限公司RocheTdscienceSigma德国RM2235德国LEICARM2235上海成顺仪器仪表有限公司德国OLYMPUSBX60上海精科宁波新芝科器研究所JY92．2D‘德国Heraeus德国Eppendorf德