碘化 n-正丁基氟哌啶醇抑制机械损伤诱导血管平滑肌细胞增殖的作用及机制研究

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1、硕士学位论文碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制机械损伤诱导血管平滑题目肌细胞增殖的作用及机制研究EffectandmechanismofN-n-butylHaloperidol英文题目Iodideontheproliferationofratvascularsmoothmusclecellsinducedbymechanicalinjury姓名韩莎莎学号10920071所在学院医学院导师姓名黄展勤副教授专业药理学入学日期2009-09答辩日期2012-06学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它

2、机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文碘化N-正丁基氟哌啶醇

3、抑制机械损伤诱导血管平滑肌细胞增殖的作用及机制研究研究生：韩莎莎导师：黄展勤副教授摘要术后再狭窄是临床上血管手术后常见的现象。术中对血管细胞的损伤及血管壁完整性的破坏是导致再狭窄的始动因素。中膜平滑肌细胞增殖在此病理过程中具有重要作用，而丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和下游效应因子早期生长反应因子-1(Egr-1)可能涉及细胞损伤后增殖过程。碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)是本实验室合成的一种新型的氟哌啶醇衍生物，具有心肌保护作用。本研究在体外建立机械损伤致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖模型，探讨其可能的分子机制，并研究F2对VSMCs损伤后增殖的作用及相关机制。目的探

4、讨机械损伤致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的分子机制以及碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对其作用及相关机制。方法1Sprague-Dawley大鼠胸主动脉平滑肌细胞体外培养：采用组织块贴壁法。2Sprague-Dawley大鼠胸主动脉平滑肌细胞鉴定：采用免疫细胞化学方法加以鉴定。3体外机械损伤模型的建立：采用划线法，损伤培养细胞。4CCK-8法检测VSMCs增殖情况。5流式细胞仪(FCM)观察分析VSMCs细胞周期分布特征的改变。6Western-blot方法测定VSMCs中p-/-MEK，p-/-ERK，p-p38/JNK，Egr-1蛋白水平。7RealtimeRT-PCR方

5、法测定VSMCs中MEK和Egr-1mRNA表达水平。8MEKsiRNA转染VSMCs，观察细胞中的p-/-MEK、p-ERK和Egr-1蛋白及其mRNAⅠ汕头大学医学院硕士学位论文的表达变化。结果1原代培养4～7天左右可见组织块周围有细胞长出，2～3周达亚融合，传代后细胞“峰、谷”状生长明显。2-SMactin免疫细胞化学染色阳性。3CCK-8检测结果显示机械损伤模型组VSMCs有显著增殖(P<0.01)，而F2剂量依赖地抑制损伤后VSMCs增殖。4机械损伤后，G0/G1期的细胞比例减少,S期和G2/M期细胞比例增加；F2可显著抑制损伤后S期和G2/M期细胞比例的升高，增加

6、G0/G1期细胞的比例，有效阻止细胞进入S期。MEK抑制剂pd98059和U0126也均具有同样作用效果，即抑制损伤后细胞周期的改变。5与Control组相比，机械损伤后VSMCs中p-MEK/ERK蛋白有明显升高，在5~10min表达最高，p-p38/JNK未见明显变化，MEK/ERK蛋白表达基本不变。MEKmRNA表达量在损伤后升高，2.5h达到高峰。6机械损伤后VSMCs中Egr-1蛋白及其mRNA表达明显升高。Egr-1蛋白在损伤1h后表达明显升高，2h达高峰，此后逐渐下降。Egr-1mRNA在损伤后1h内合成量较高，其中在45min表达量最高。7MEK抑制剂pd980

7、59和U0126可以明显抑制损伤后p-MEK/ERK和Egr-1蛋白及其mRNA表达升高。8与模型组比较，MEKsiRNA干扰后可降低损伤后VSMCs中p-MEK/ERK、MEK和Egr-1蛋白以及MEK和Egr-1mRNA的过度表达。9F2可以剂量依赖地抑制机械损伤后VSMCs中p-MEK/ERK和Egr-1蛋白及其mRNA的过度表达。结论体外机械损伤可致血管平滑肌细胞增殖，其分子机制可能与MEK/ERK/Egr-1信号通路途径有关；碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制机械损伤所致的VSMCs增殖，