碘化n-正丁基氟哌啶醇对心肌细胞缺氧复氧rosegr-1信号通路的调节作用

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1、汕头大学硕士学位论文碘化N-正丁基氟哌啶醇对心肌细胞缺氧复氧ROS/Egr-1信号通路的调节作用硕士研究生：廖晗导师：张艳美副研究员专业：药理学研究方向：心血管药物的研究与开发申请学位：医学硕士入学时间：2010年9月中国.汕头2013.05EffectofN-n-butylhaloperidoliodideonROS/Egr-1signalingpathwayincardiomyocytesafterhypoxia/reoxygenationbyHanLiaoSubmittedinpartialfulfillmentofthere

2、quirementsforthedegreeofMasterofMedicineThesisAdvisor:AssociateProf.Yan-meiZhangDepartmentofPharmacologySHANTOUUNIVERSITYMEDICALCOLLEGEMay,2013汕头大学2013届硕士学位论文摘要碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butylhaloperidoliodide，F2）是我课题组合成的一个新化合物。我们以往研究表明，F2有拮抗心肌缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）或心肌细胞

3、缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤的作用，其主要机制包括阻断细胞膜钙通道及抑制早期生长反应基因-1(earlygrowthresponsegene-1，Egr-1)过表达。进一步研究发现，F2的保护作用与其提高心肌组织超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）活性、降低丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量有关，间接表明F2对ROS起着负性调节作用。此外，我们研究还发现，给予Egr-1反义寡核苷酸也有类似F2的作用，表明Egr-1表达与ROS之间存在一定的关系。大量研究

4、表明，活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）所致的氧化应激在I/R损伤过程中起着重要作用。而近年来，转录因子Egr-1又被认为是I/R损伤的共同分子基础。据文献报道，ROS可以激活丝裂原活化蛋白激酶家族（mitogen-activatedproteinkinases，MAPKs）尤其是c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminalkinase,JNK）。而又有研究表明MAPK信号通路中的JNK及ERK1/2可能参与了I/R激活的Egr-1表达。因此，本研究以JNK及ERK1/2为切入点，借助于H9c2心

5、肌细胞系H/R模型，探讨H/R时，H9c2心肌细胞内是否存在ROS/JNK（ERK1/2）/Egr-1信号通路以及F2是否可以通过调节此通路起到保护H/R心肌的作用，这将进一步补充和完善F2的作用机制，提高其研发价值。I/R损伤是常见的病理生理过程，目前I/R损伤的发病机制尚未完全明了。国内外进行I/R的相关研究时，主要集中在受累最严重的脏器特有或主要的组成成分，制作H/R模型时也普遍采用其主要的或特有的细胞。而I/R时，炎症细胞是造成I/R损伤进展的主要参与者，但鲜有建立炎症细胞H/R模型并进行相关研究的报道。因此，本研究以巨噬细

6、胞RAW264.7为对象，建立了炎症细胞H/R模型，并对其生物学意义作初步探讨。方法：第一部分：H9c2心肌细胞1.将培养的H9c2心肌细胞随机分为10组：对照（control）组、control+ROS激活剂XO/HX（con+XO/HX）组、control+JNK激动剂ANISO（con+ANISO）组、缺氧复氧（H/R）组、H/R+ROS清除剂依达拉奉（H/R+EDA）组、H/R+ROS清除剂N-乙酰基-L-半胱氨酸I汕头大学2013届硕士学位论文（H/R+NAC）组、H/R+JNK抑制剂SP600125（H/R+SP6001

7、25）组、H/R+F2组、H/R+F2+XO/HX（H/R+F2+XO/HX）组、H/R+F2+ANISO（H/R+F2+ANISO）组。control组于实验前换用新鲜培养基持续培养细胞3h；con+XO/HX组和con+ANISO组分别于培养基中加入XO/HX、ANISO常氧培养1h，再换用新鲜培养基培养3h；H/R组细胞换用被高纯氮气饱和30min的缺氧液，置缺氧盒中37℃密闭培养2h，然后换用正常培养基于常规条件下培养细胞1h，建立H/R损伤模型；H/R+EDA组、H/R+NAC组和H/R+F2组于缺氧前30min、缺氧液及

8、复氧培养基中分别给予EDA（2×10-4M）、NAC（8×10-3M）和F2(1×10-6M)；H/R+SP600125组于缺氧前30min和缺氧液中给予SP600125(2×10-5M)；H/R+F-62+XO/HX组和H/R+F2