复方灯盏花滴丸对h2o2致pc12细胞损伤的保护作用研究

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1、《中国图书资料分类法》分类号：单位代码：10660R967.2学号：S090061贵阳医学院2012届硕士学位论文复方灯盏花滴丸对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用研究研究生：徐菁霞导师：宛蕾教授年级：2009级专业：药理学2012年5月20日目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„01前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„02材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„03结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„09讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„27结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„35参考文献„„„„„„„„„„„„„

2、„„„„„„35英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„38致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40缩略词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„42附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„43贵阳医学院2012届硕士研究生论文复方灯盏花滴丸对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用研究专业名称：药理学研究生：徐菁霞导师：宛蕾教授摘要目的研究复方灯盏花滴丸对氧化应激致大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12细胞）损伤的保护作用，并探讨其可能的作用机制。方法培养PC12细胞，实验分为6组：空白对照组，氧化损伤组（模型

3、组），复方灯盏花滴丸不同浓度组（0.763μg/mL、3.052μg/mL、12.207μg/mL），阳性药组（维生素E4.307μg/mL），药物干预24h后，除空白对照组外，其余各细胞组用300μmol/L过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞损伤2h，进行相关指标检测：（1）倒置显微镜下细胞形态学观察；（2）线粒体琥珀酸脱氢酶（MTT）检测细胞存活率；（3）光化学法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放的测定；（4）黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性以及硫代巴比妥法测定丙二醛（MDA）含量；（5）一氧化氮(NO)含量检测以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性

4、测定；（6）AnnexinV-FITC/PI双染法测细胞凋亡率；（7）免疫细胞化学法测定细胞色素C含量；（8）免疫细胞化学法测定caspase-3蛋白的表达。结果300μmol/L的H2O2损伤细胞2h可明显降低PC12细胞的增殖活性，增加LDH的外漏，提高细胞内MDA含量，降低SOD活性，增高NO含量，提高iNOS活性，增加细胞色素C的释放，提高caspase-3的表达，引起细胞凋亡，与空白对照组比较有统计学差异（P＜0.05），表明H2O2所致PC12细胞损伤模型复制成功；不同浓度的复方灯盏花滴丸可提高PC12的MTT吸光度值，减少细胞内LDH的外漏，减少MDA产

5、生，增强SOD活性，减少NO的产生及降低iNOS活性，减少细胞色素C的释放，减少caspase-3的表达，抑制细胞凋亡，与模型组比较有显著性差异（P＜0.01）。结论复方灯盏花滴丸可对过氧化氢所致的PC12细胞的损伤有保护作用，能提高PC12细胞的存活率及改善其形态，减少氧化损伤、细胞凋亡，其作用机制可能包括：（1）稳定细胞膜；（2）增加清除氧自由基的能力，提高抗脂质过氧化能力；（3）减少NO的产生及抑制iNOS的活性；（4）减少细胞色素C的释放，抑制caspase-3的表达，干扰线粒体细胞凋亡信号转导途径从而抑制细胞凋亡。关键词复方灯盏花滴丸；PC12细胞；氧化应激

6、；细胞凋亡；细胞色素C；caspase-3；1贵阳医学院2012届硕士研究生论文前言神经系统疾病特别是脑血管病已成为危害人们健康的主要疾病之一，患病率在不断上升，严重影响着人类的健康，降低生活质量，已日益引起了人们高度重视。近年来的研究发现，氧化应激参与许多中枢神经系统疾病的发生，如脑缺血，脑肿瘤，脑外伤，神经退行性疾病等。氧化应激学说在缺血性脑血管疾病缺血再[1]灌注病理机制中起关键作用。在这些病理状态下，可产生大量的氧自由基，并引起机体自稳机制紊乱，导致细胞损伤甚至死亡。氧化还原反应是体内代谢的基本反应，反应过程会产生大量的氧自由基，在生命活动中起着重要的作用。在

7、正常的生理条件下，体内不断地产生氧自由基的同时，体内又有一套有效的机制不断地清除氧自由基，始终使氧自由基的浓度维持在无害的低水平平衡状态。但当氧自由基的产生量超过了体内清除的能力，则会对机体造成严重的损害。活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）是指一组含有化学性质活泼的含氧功能基团的化合物，包括含氧自由基、氢过氧化物、脂质过氧化物、环氧代谢物等。对于神经细胞而言，诱发其凋亡的机制复杂，其中活性氧自由基通过引起细胞脂质过氧[2]化、损伤DNA分子或者调节细胞凋亡相关基因而诱导细胞凋亡。我国中药资源丰富，如能寻找到改善神经细胞的损伤