hmgb1对病毒性心肌炎dna粘膜疫苗的免疫增强作用及其机制

《hmgb1对病毒性心肌炎dna粘膜疫苗的免疫增强作用及其机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：≤牡日期：冱毕幽业苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情

2、报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在——年～月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：趁煎难日导师签名：壅丛堂Ft期：∞以一603HMGBI对病毒性心肌炎DNA粘膜疫苗的免疫增强作用及其机制中文摘要病毒性心肌炎(viralmyocarditis，VMC)是一种临床常见的心血管系统疾病。由柯萨奇病毒、埃可(ECHO)、脊髓灰质炎、腺病毒4

3、0、41，流感病毒等多种病毒感染引起的心肌局限性或弥漫性的急性或慢性炎症病变，属于感染性心肌疾病。其中以肠道病毒，特别是柯萨奇病毒B3型感染最为常见。目前尚无根治病毒感染的有效治疗方法，因此新型、高效的病毒性心肌炎疫苗的研制十分必要。由于CVB3主要经胃肠道粘膜入侵机体，诱导有效的粘膜免疫应答对于有效控制病毒感染及后续心肌炎发病具有重要意义。考虑到粘膜疫苗是诱导粘膜免疫应答的最有效方式，因此制备有效的CVB3特异性粘膜疫苗成为病毒性心肌炎防治的重要策略。我们实验室前期制备了编码CVB3优势抗原VPl的真核表达质粒pVPl，通过滴鼻免疫小鼠，诱生了免疫应答，保护了30％多的感

4、染CVB3的小鼠免于死亡。然而，其免疫效果尚需进一步加强，如何提高该疫苗的保护效应成为我们后续研究的重点。HMGBl存在于真核细胞核内的非组蛋白染色体结合蛋白，因其在聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)中迁移速度快而得名。作为新型的粘膜免疫佐剂，与编码CVB3重要保护性抗原VPl质粒相混合然后用chitosan包裹进行滴鼻免疫小鼠。为了检验疫苗引发的全身免疫反应。收集免疫小鼠的血清行ELISA检测。结果显示：与单独免疫组相比，HMGBl共免疫组诱生了全身性特异。I生IgO，同时为了验证免疫反应是Thl还是Th2反应，我们检NgTIgG亚型IgG2a*[1IgGl，结果发现HMGB

5、l共免疫组诱生的全身免疫反应倾向于Thl反应。提示HMGBl作为粘膜佐剂可以促进免疫反应向Thl进行，这样更有利于机体抵御病毒的感染。更重要的是HMGBl增加了肠道分泌IgA的能力，因CVB3是肠道病毒，所以这对病毒的清除有重要的意义。细胞免疫对病毒的清除有着关键的作用，尤其是T细胞。为此我们先是检验了T细胞的增殖，Brdu增殖结果表明：HMGBl共免疫组小鼠脾脏淋巴细胞(OD370nm处的吸光度为1．24)比其他组小鼠脾脏淋巴细胞(VPl组小鼠OD370nm处的吸光度为O．75；HMGBl组小鼠OD370nm处的吸光度为O．36；空载组小鼠OD370nm处的吸光度为0．2

6、5)增殖幅度明显增加。同时肠系膜淋巴结淋巴细胞(OD370nm处的吸光度为0．72)的增殖幅度也显著大于其他组小鼠(VPl组小鼠OD370nm处的吸光度为O．36；HMGBl组小鼠OD370nm处的吸光度为0．16；中文摘要HMGBl对病毒性心肌炎DNA粘膜疫苗的免疫增强作用及其机制空载组小鼠OD370nm处的吸光度为O．10)肠系膜淋巴细胞的增殖。HMGBl共免疫组较其他组更能增加脾脏和肠系膜淋巴结中T细胞的增殖，为发挥免疫效应打下了基础。T细胞免疫作用主要是CTL，而CTL对于抗病毒的作用又十分关键。前面结果已经表明HMGBl能增加T细胞的增殖，那么为了检测增殖后的作用

7、，我们做了脾脏和淋巴结细胞的CTL，结果表明HMGBl共免疫组小鼠无论是脾脏细胞还是肠系膜淋巴结细胞的CTL作用都高于单免疫组小鼠和空载体小鼠。提示了HMGBl能有效的增强T细胞的CTL作用，对于增强机体抵御病毒的能力有重要作用。淋巴细胞增殖后发挥效应作用，IFN．Y是效应细胞分泌的-re清除病毒的最重要的细胞因子。为了验证HMGBl作为新型的粘膜佐剂对于T细胞的IFN吖分泌量的影响，我们检测了脾脏细胞和肠系膜淋巴结细胞的IFN．Y的分泌量。ELISPOT结果显示HGMBl共免疫组小鼠不仅脾脏细胞IFN吖+T细胞的