新型m细胞靶向性dna疫苗的制备及其对cvb3病毒性心肌炎的免疫保护作用

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1、１々火襄１爭ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕±学位论文Ｊ＾Ｋ＾＾ｍＫＫＫＭ论文题目新型Ｍ细胞铅向性ＤＮＡ疫苗的制备及其对ＣＶＢＩ件心肌炎的免巧保护作用３病壺研究生姓名樊向梅指导教师姓名熊思东专业名称免疫学研究方向感染与免疫论文提交日期２０１５年４月Ｉ苏州大学学位论文独创性声明本入郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研巧工作所取得的成果。除文中已经挂明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果，也不含为获得苏

2、州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均邑在文中明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。Ｗ巧據；？口皆．备论文作者签名：礙日期：Ｃ苏州大学学位论文使用授权声巧本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即。本学位论文电子文档的内容和纸：学位论文著作权归属苏州大学一质论文的内容相致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中也、、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文

3、挡，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段，允许论文被查阅和借阅保存和汇编学位论文，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口月解密后适用本规定。本学位论文属在＿＿年＾非涉密论文（３论义作者签名巧施日期：紙夺ｔ＇．〇导师签名４．：日期：减新型黏膜Ｍ细胞巧向ＤＮＡ巧苗的制备及其对ＣＶＢ３病毒巧也肌炎的免巧保护作用中文巧要中文摘要黏膜免疫系统作为人体抵抗外来病原体的第一道防线，发挥重要的抗病毒作用。通过在肠黏膜表面诱生特异性的黏膜免疫应答可Ｗ有效抵抗病毒和细菌等的攻击

4、，从而控制感染程度。因此黏膜疫苗的开发受到了研究者的亲睐，但是由于黏膜疫苗诱生免疫应答能力的不足和诱导免疫耐受的倾向，目前只有少量的黏膜疫苗研制成功并投入使用。因此在黏膜疫苗的的研制过程中如何提高其免疫应答能力成为一个急需解决的问题。一ＷＭ细胞是位于派氏结中的种特化的上皮细胞，数量较少。其基底部是不连。续的，能够允许淋己细胞的自由通过，有利于其抗原转运速率的提高与其邻近肠上皮细胞相比，Ｍ细胞顶膜面缺乏较厚的糖弯结构和祐液，这使得Ｍ细胞顶膜。的关键受体易于被细菌或病毒识别并结合，促进其对外来病原体的巧别因此，

5、我们利用Ｍ细胞这种特殊的结构设计了一Ｍ细胞靴向性疫苗种新型的。ＧＰ２是一类糖蛋白，作为抗原识别受体特异性的表达于小肠上皮Ｍ细胞顶膜面一Ｍ细，是第个被发现在人和小鼠胞表面均能表达的分子，具有更好的特异性。己发现大肠杆菌Ｉ型菌毛蛋白ＦｉｍＨ能够与ＧＰ２特异性结合。因此，我们在实验一室原有疫苗ＣＳ－ＶＰｐｌ的基础上引入ＦｉｍＨ蛋白，设计种新型的黏膜递送系统，从而评估其的诱生ＣＶＢ３特异性的黏膜免疫应答及其对ＣＶＢ３诱导的病毒性也肌炎的保护作用。目前我们己有的结果：－－－、ＣＳＦｉｍＨＤＮＡ递送系统的构建及其特性研究

6、－－ＶＰＭ细胞範向递送系统ＣＳＦｉｍＨｐｌ的制备及其理化性质的研究：通过ＥＤＣ活化Ｆ一ｉｍＨ蛋白的綾基，使其能够与ＣＳ的氨基相互作用进而使两者偶联到起，－ＦｍＨ－制备成ＣＳｉｍＨ祀向递送系统。采用复合物共沉淀法将已制备好的ＦＣＳ递送ｉｃ３－系统与ＤＮＡ．１ｖｌ质粒混合制成。结果显示ｐｐ实验所需的纳米粒：（１）我们的偶联效率大约为６０％，即接近６０％的ＦｉｍＨ蛋白与ＣＳ发生偶联反应。Ｓ－（２）在ＣＦｉｍＨ靴向系统的保护下，ＤＮＡ可Ｗ避免被ＤＮａｓｅｌ酶解，很好Ｉ中文巧要新型親巧Ｍ细胞巧向ＤＮＡ疫苗的制备及

7、其对ＣＶＢ３病毒化ｂ肌炎的免巧保护作用的保护了。通过粒径检测发现该纳米粒的粒径大ＤＮＡ使其能够顺利到达靴向部位－４００ｎｍ之间约在２００。二、口服免疫诱生的ＣＶＢ３特异性免疫应答及免疫保护ＩＥ向性疫苗ＣＳ－Ｆ－ｉｍＨｐＶＰｌ口服免疫小鼠后诱导的ＣＶＢ３特异性黏膜免疫应－－－ＶＰｌ：我们的实验组为ＣＳＦｉｍＨＶＰｌ，对照组为ＣＳ空载对照组答ｐｐ，－－－ＣＳＦｉｍＨｐｃＤＮＡ３．０和ＣＳＰＣＤＮＡ３．０。隔周免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，共免疫四次，每次免疫的质粒总量为２５ｕｇ。末次免疫后两周ＣＶＢ３攻毒，检测该疫苗

8、诱生的ＣＶＢ３特异性的黏膜免疫应答。结果显示：－ＣＳＦ－（１）靴向性疫苗ｉｍＨｐＶＰ１经口服后可Ｗ诱导高水平的黏膜ＩｇＡ抗体，但是没有显著诱生高水平的血清ＩｇＧ水平。－－（２