dpp4抑制剂选择性评价方法的建立以及msg小鼠dpp4活性升高的可能机制和药物的抑制作用

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1、博士学位论文学校代码：学号：DPP4抑制剂选择性评价方法的建立以及MSG小鼠DPP4活性升高的可能机制和药物的抑制作用所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：药物研究所刘景龙申竹芳研究员陈晓光、张建军、申竹芳药理学抗糖尿病药物药理2012年5月DISSERT氏rf0NofPh．D．ChineseAcademyofMedicalSciences＆PekingUnionMedicalCollege目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10第一章DPP4抑制剂筛选及候选化合物降血糖活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13商订一言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1第一节DPP4抑制剂离体活性筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16小结⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17第二节DPP4抑制剂候选化合物体内降血糖作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18／J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l第二章基于重组人源DPP8和DPP9的DPP4抑制剂选择性评价方法的建立⋯⋯⋯22前

4、言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22第一节PET32一a(+)-DPP8质粒构建及重组人源DPP8融合蛋白表达⋯⋯⋯⋯24材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．人源DPP8基因序列的PCR扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322．PET32一a(十)一DPP8质粒构建及双酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯333．序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯344．重组DPP8融合蛋白表达及SDS～PAGE鉴定⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯365，重组DPP8融合蛋白酶活性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯366．DPPS／9抑制剂(UAMC00132)对重组DPP8融合蛋白酶活性抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37第二节重组人源DPP8蛋白纯化及体外酶学水平选择性评价方法的建立⋯38材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯401．重组人源DPP8融合蛋白纯化及SDS—PAGE分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、402．纯化的重组DPP8融合蛋l白Western—blot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40DISSER"汀10NofPh．D。ChineseAcademyofMedicalSciences＆PekingUnionMedicalCollege3．最适DPP8蛋白浓度确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯414．最适底物浓度确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4l5．选择性评价方法可靠性验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42／I、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42第三节DPP8蛋白在293E细胞中的表达及胞内选择性

7、评价方法的建立⋯⋯43材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯451．DPP8基因序列的PCR扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯452．PcDNA3．卜(+)-DPP8质粒构建及双酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯463．序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯474．293E细胞表达的DPP8蛋白活性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯475．UAI＼，IC00132对293E细胞表达的DPP8活性抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯476．UAMC00132对胞内DPP8蛋

8、白活性抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48，j、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48第四节PET32一a(+)-DPP9质粒构建及重组人源DPP9融合蛋白表达⋯⋯⋯⋯49材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯