高效毛细管电泳测定利塞膦酸钠的方法研究

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1、高效毛细管电泳测定利塞膦酸钠的方法研究StudyontheDeterminationofRisedronatebyHighPerformanceCapillaryElectrophoresis学科专业：药剂学研究生：孙丽指导教师：谭丰苹副教授天津大学药物科学与技术学院二零一貮年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我

2、一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日中文摘要利塞膦酸钠（Risedronate，

3、Rsd）属于第三代双膦酸盐类药物，可抑制破骨细胞介导的骨吸收和调节骨代谢，临床上主要用于变形性骨炎和骨质疏松症等的治疗，且未见严重不良反应。Rsd口服平均生物利用度小于1%，因此，口服后血浆中Rsd的浓度极低，仅为ng/ml；同时，该化合物分子极性大，给其分析方法的建立带来极大难度。本论文主要通过毛细管区带电泳（CapillaryZoneElectrophoresis，CZE）条件的优化，并以此为平台建立了Rsd在原料药、市售片剂和大鼠血浆中的定量方法。首先考察了缓冲液组成及其pH值和离子浓度，工作电压，进样

4、时间等多种影响分离的因素，初步确定的电泳条件为：直径50m，有效长度40cm未包被的石英毛细管；pH6.0，浓度为15mM的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液为背景电解o质；工作电压+20kV；进样电压+20kV，进样时间8s；温度25C；检测波长262nm。结果在此条件下Rsd的出峰时间小于5min，具有快速，简便和低成本的特点。其次建立了原料药及其市售片剂中Rsd定量检测方法。Rsd经10%H2O2强力破坏发生快速降解，6h内降解了40.5%。考察了柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH值和离子浓度对Rsd与降解产物的分离

5、度（Resolution，Rs）的影响。根据人用药物注册技术要求国际协调会议（ICH）的指导原则进行了方法学验证，包括专2属性，耐用性，线性（r=0.9997），灵敏度（检测限为3g/ml），准确度（95.32~97.43%）和精密度（%RSD均小于2.26%）。所有破坏性试验样品均在210nm和262nm处测定峰面积以进行峰纯度分析。作为替代HPLC法分析可解离分子的一种很好的选择，CZE在本试验中已成功地应用于市售Rsd片剂含量的测定。论文进一步建立了血浆中Rsd定量检测方法。血浆样品的前处理包括三氯乙

6、酸（TrichloroaceticAcid，TCA）除血浆蛋白和碱性条件下钙离子助沉淀法提取药物。方法学考察结果表明血浆中内源性杂质对样品的测定没有干扰，该方法在300~2500ng/ml浓度范围内线性关系良好；检测限和定量限分别为100和300ng/ml；以%RSD表示精密度，大于8.52%；提取回收率表示准确度，大于87.95%。对大鼠口服给药50mgRsd水溶液1h后的血浆样品进行分析得到了令人满意的精密度和准确度。本法简便、快速且低成本，为血浆中Rsd的测定提供了新的更为理想的方法学手段。关键词：利塞

7、膦酸钠，毛细管电泳，片剂，血浆ABSTRACTRisedronate(Rsd),anovel,orallyadministeredpyridinylbisphosphonatescommonlyusedinthetreatmentofosteoporosisandPaget’sdiseasewithoutseriousadversereactionsasitinhibitsosteoclast-mediatedboneresorptionandmodulatesbonemetabolism.Oralbioav

8、ailabilityisapproximately0.6%atthetherapeuticdoseleadingtoonlylowng/mllevelspresentinginbloodandotherbiologicalfluids.DuetothehighpolarityofRsd,thedevelopmentofadeterminationmethodfortheanalysisofRsdpr