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《重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子hespintor+kazal结构域地原核表达、纯化及活性鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、冯洁等/重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor的原核表达、纯化及活性鉴定1607生物工程学报ChineseJournalofBiotechnologyNovember25,2012,29(11):1607−1616http://journals.im.ac.cn/cjbcn©2013ChinJBiotech,Allrightsreserved医学与免疫生物技术重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子HespintorKazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定1,213333311冯洁，伦永志，李越，武会娟
2、，李宝明，魏玲，张小莉，王雪蕾，迟庆1大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁大连1166222大连大学生命科学与技术学院，辽宁大连1166223北京市理化分析测试中心，北京100094冯洁,伦永志,李越,等.重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子HespintorKazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定.生物工程学报,2013,29(11):1607−1616.FengJ,LunYZ,LiY,etal.Prokaryoticexpression,purificationandactivityan
3、alysisofrecombinanthumanserineproteaseinhibitorHespintorKazalDomain.ChinJBiotech,2013,29(11):1607−1616.摘要:Hespintor是应用抑制消减杂交技术(SSH)从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到的一未知功能蛋白，序列分析表明该蛋白属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serineproteinaseinhibitor,Serpin)家族中的一个分泌型新成员，具有与食管癌相关基因2(Esopha
4、gealcancerrelatedgene2,ECRG2)高度同源的Serpin基本结构。为了进一步阐明Hespintor的生物学功能，必须得到纯化的Hespintor蛋白。先将HespintorKazal结构域编码序列亚克隆至原核表达载体pET-40b(+)，转化至Rosetta(DE3)表达宿主菌中。经0.25mmol/LIPTG，30℃诱导5h获得了分子量约为42kDa的Hespintor-Kazal重组融合蛋白的优化表达，Westernblotting证实了重组蛋白的特异性。Hespint
5、or-Kazal重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达，利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明，纯化的Hespintor-Kazal重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性，提示Hespintor具有作为一种新型抗肿瘤药物的潜在开发价值。关键词:丝氨酸蛋白酶抑制因子,Hespintor,Kazal结构域,原核表达Received:January8,2013;Accepted:June17,2013Supportedby:DalianScienceandT
6、echnologyPlanningProject(No.2010E13SF138).Correspondingauthor:YongzhiLun.Tel:+86-411-87402740;E-mail:lunyz@163.com大连市科技计划项目(No.2010E13SF138)资助。1608ISSN1000-3061CN11-1998/QChinJBiotechNovember25,2013Vol.29No.11Prokaryoticexpression,purificationandactiv
7、ityanalysisofrecombinanthumanserineproteaseinhibitorHespintorKazalDomain1,2133333JieFeng,YongzhiLun,YueLi,HuijuanWu,BaomingLi,LingWei,XiaoliZhang,11XueleiWang,andQingChi1LiaoningProvincialUniversityKeyLaboratoryofBiophysics,CollegeofMedicine,DalianUni
8、versity,Dalian116622Liaoning,China2CollegeofLifeScienceandTechnology,DalianUniversity,Dalian116622Liaoning,China3BeijingCenterforPhysicalandChemicalAnalysis,Beijing100094,ChinaAbstract:Hespintorisanunknownfunctionproteinthatwasgotfromhepatobla
