致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重pcr检测

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1、万方数据·640·主堡煎鱼疸堂盘查!!!i生!旦箜!!鲞箜!塑曼!堕』垦逝!!坐i!!!璺!堕!坐睦!!!!!，y!!．；!，堕!．!致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测王花茹王长军陆承平潘秀珍陶开华唐家琪·猪链球菌感染·【摘要】目的建立多重PCR体系，实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf(epf”)和s一的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列，设计和合成4对特异性引物，通过体系和条件优化，建立多重PCR检测方法，并对72株种属背景明确的实验菌株(其中猪链球菌48株、阴性对照株24株)及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析。结果48株猪链

2、球菌中，cps2检出率为33．3％(16／48)、mrp检出率为29．2％(14／48)、eU检出率为25％(12／48)、epf+检出率为6．3％(3／48)、sly检出率为54．2％(26／48)，上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符；24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性。结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测，特异性和敏感性好，为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。【关键词】猪链球菌2型；毒力因子；荚膜多糖；溶菌酶释放蛋白；胞外因子；溶血素Detectionofvirulence

3、～associatedfactorsofStreptococcussuisbymultiplexPCRassayW：4NGH“a—ru’，W-ANGChang-jun，LUCheng—ping，PANXiu—zhen，TAOKai—hua，TANGyia—qi．+HuadongResearchInstituteforMedicineandBiotechnics，Na卵iing210002，ChinaCorrespondingauthor：TANGJia—qi，Email：tjq85@hotmail．com【Abstract】objectiveTorapidlyandsen

4、sitivelydetectthefourvirulence—associatedfactorsofStreptococcussuis，amultiplexPCRwasdeveloped．MethodsIntheprocessofthisreaction，fourdistinctDNAtargetswereamplified．Onetargetwasbasedontheserotype2(and1／2)specificcpsgeneandtheotherswerebasedonStreptococcussuismrp，epf(epf’)andslygene，encodin

5、gtheMRP、EF(EF’)andSlyproteinsofStreptococcussuis．72isolates．whichincluding48strainsofStreptococcussuisand24strainsofnegativecontr01．and49clinicalspecimensweredetectedbythemultiplexPCRassay．ResultsA1lPCRproductsweredetectedbyelectrophoresison1．2％agarosegels．Withthe48Streptococcussuisstrain

6、s．thepositivedetectionratesofcps2+，mrp+，epf+，epf’+andsly+were16／48，14／48，12／48，3／48and26／48，respectively．Theresultswereconfirmedbybacteriologicalexamination．Therewerenospecificamplificationproductsincluding49clinicalspecimensand24negativecontrolstrains．ConclusionTheresultsdemonstratedthat

7、multiplexPCRwasahighlyspecificandsensitivediagnostictoolforthedetectionofvirulence—associatedfactorsofstreptococcussuis．【Keywords】Streptococcussuisserotype2；Virulence—associatedfactors；Capsularpolysaccharide；Muraminidasereleasedprotein；Extracellularfactor；Suilysin猪链