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时间:2019-02-17
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1、宁夏大学硕士学位论文牛C5基因多态性与奶牛乳腺炎的相关研究姓名:李娜申请学位级别:硕士专业:动物遗传育种与繁殖指导教师:刘顺德;王长法201204摘要C5是补体系统中一种组分,在机体免疫防御、维持机体稳定中起重要作用。因此,本研究以C5基因作为奶牛乳房炎的候选基因,选取605头中国荷斯坦奶牛为研究对象,采用巢式PCR、DNA测序、创造酶切位点法PCR及SSCP方法进行SNP的筛选,发现在中国荷斯坦牛c5基因第30内含子、34内含子、41外显子存在单核苷酸多态性(sNPs),分别为T73830G、C81733G和T92133A,均为首次报道的位点。研究发现,三个突变位点突变
2、等位基因的频率分别为0.80,O.28,0.25;PIC值分别为O.27、0.32、0.32,且均为中度多态,遗传变异较大。此外,经#适合性检验,这三个位点均未达到Hardy.Weinberg平衡状态。分析605头荷斯坦奶牛C5基因T73830G、C81733G和T92133A三个位点的多态性与305d产奶量、乳蛋白率、乳脂率与SCS这四个产奶性状,结果发现T73830G和T92133A两个位点在305d产奶量、乳蛋白率、乳脂率有显著影响,对SCS无显著影响。对C5基因3个多态位点T73830G、C81733G和T92133A进行了单倍型组合分析,共构建出8种单倍型,只出
3、现21种单倍型组合。结果显示H4H1单倍型组合个体乳脂率最高;单倍型组合H2H6个体在乳蛋白率上最高,单倍型组合H4H6个体的305天产奶量最高,单倍型组合H4H1个体的体细胞评分最低,为抗乳腺炎最强的单倍型组合。此外,本试验还随机选取301头荷斯坦奶牛研究牛群中C5基因的三个SNP位点及单倍型组合与ACH50和CH50值之间的关系。研究结果表明,三个位点与ACH50和CH50值均没有显著差异,但单倍型组合H1H5个体的ACH50的水平最高,各单倍型组合个体与CH50之间没有显著差异。关键词:奶牛,SNPs,产奶性状,体细胞分,乳腺炎AbstractThefifthcom
4、ponentofcomplement(c5),amemberofthecomplementsystem,articipatesinbothcytolyticandinflammatoryprocesses.ThemajorroleofC5istomediatesmanyinflammationandcytolyticevents.Inthepresentstudy,wediscoveredthreesingle—nucleotidepolymorphismsoftheC5geneinChineseHolsteinandanalyzedtheirassociationswi
5、thmilktraits.ByscreeningthegeneticvariationofC5genein605individualsusingcreatedrestrictionsite—polymerasechainreaction(CRS-PCR),PCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism(PCR-RFLP),Polymerasechainreaction—singlestrandconformationpolymorphism(PCR—SSCP)andDNAsequencingtechniques,threenewSNPs
6、,T73830G,C81733G,T92133A,werefoundtohaveallelefrequenciesof80%,28%and25%ofthemutantallele,respectively.WhilethetwoSNPs(T73830G,C81733G)arelocatedwithinintron30andintron34,respectively.TheSNPT92133Aresidesintheexon41region,whichisasynonymoussubstitution.Thevalueofpolymorphisminformationind
7、icatedthatChineseHolsteincattlepossessedintermediategeneticdiversityforT73830G,C81733G,T92133Alocus(0.250.05).Amongthe605ChineseHolsteincattlewithDairyHerdImprovement(DHI)
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