曲妥珠单抗对her-2过表达乳腺癌细胞株mtor信号通路的影响

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文曲妥珠单抗对Her．2过表达乳腺癌细胞株mTOR信号通路的影响TheeffectofTrastuzumabonthemTORsignalingintheHer2‘breastcancer',ellHer-2-overexDresslnRreastCacecell课题来源：自选专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员临床医学郭婧昀叶长生教授郑文博教授邓永键教授盛权根教授李颖嘉教授论文评阅人王曦教授郑文博教授2012年3月20日广州曲妥珠单抗对Her．2过表达

2、乳腺癌mTOR信号通路的影响硕士研究生：郭婧昀指导老师：叶长生主任摘要哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR(mammaliantargetofrapamycin)是一种非典型丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，属于磷酸肌醇激酶相关蛋白激酶家族(phosphoinositidekinase--relatedkin2Lse，PIKK)，它对细胞生长、分化、增殖、迁移和存活都有重要调控作用。mTOR以两种复合物形式存在，分别为mTORCl(mTOR．raptor复合物)和mTORC2(mTOR-rictor复合物)。mTORC

3、l由mTOR、Raptor(regulatory—associatedproteinofmTOR)、mLS8／G[3L(Gproteipunit-likeprotein)、PRAS40和Deptor组成，受激素、生长因子、营养、能量、应激等刺激激活，并对雷帕霉素(rapamycin)敏感。mTORCl的激活导致下游信号40S核糖体蛋白激酶(40SribosomalproteinS6l(inaSel，$6K1)和真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(eukaryoticinitiationfactor-4Eb

4、indingprotein1，4E．BPl)的磷酸化，从而参与调节细胞生长、增殖、存活、蛋白质翻译、核糖体发生、自噬等重要生物学过程。mTORC2由mTOR、Rictor(rapamycin．insensitivecompanionofmTOR)、mLSS／GIBL、mSinl(SAPKinteractingprotein1)、PRR5／Protor和Deptor组成，对雷帕霉素耐受。mTORC2可作用于Akt，但只针对Akt的Ser473位点，并不影响Akt其他位点。其活化Akt($473)后可调控细

5、胞的生存、代谢、增殖。另外有研究认为，mTORC2在如细胞骨架组织形成等各种生物过程中也有关键作用。有研究发现mTOR信号通路在多种细胞生理活动如血管生成、胰岛素抵抗、脂肪合成以及T淋巴细胞活化等中呈现过度活化状态。也有研究认为，在炎症摘要反应中，mTOR信号通路的激活可以调控炎症。近年来，也有研究发现mTOR信号通路在癌症中高度激活，控制着众多在肿瘤发生发展中至关重要的生物学过程，因此mTOR信号通路是近年来生命科学领域的研究热点。而随着研究的不断深入，mTOR信号通路在多种常见肿瘤如乳腺癌、结直肠癌

6、、前列腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、白血病及淋巴瘤等发生发展中凸显越来越重要的地位，尽管mTOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin)及其类似物已经进入临床试验阶段，但mTOR信号的调控机制仍处于探索阶段，尚未能完全阐明。乳腺癌是当今女性最常见恶性肿瘤之一，世界范围内其发病率呈逐渐上升趋势。在我国，乳腺癌发病率已位居大城市女性恶性肿瘤的第一位。Her-2是由位于染色体17q21的c．erbB2基因编码的具有跨膜酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase，PTK)活性的跨膜糖蛋白，简称P185。临床

7、试验证实，Her-2在15％--25％的乳腺癌中有基因扩增和蛋白过表达，使肿瘤细胞更易复发或转移，无病生存期短，预后较差。曲妥珠单抗(Trastuzumab)是以Her-2为靶点的重组人源化单克隆抗体，与c．erbB2受体细胞外区域结合，具有高度亲和力和特异性阻断c．erbB2受体而产生抗肿瘤效应。现已广泛用于治疗Her-2过表达的乳腺癌患者。目前国内在曲妥珠单抗与mTORCl、mTORC2信号通路的关联性上并无明确研究。本课题通过利用Her-2过表达的乳腺癌细胞株MDA．MB-453，旨在探讨研究曲妥

8、珠单抗对mTORCl、mTORC2信号通路的影响，并观察在mTOR信号通路的影响程度上曲妥珠单抗是否优于雷帕霉素。目的探讨曲妥珠单抗对Her-2过表达乳腺癌细胞株mTOR信号通路的影响，并观察在mTOR信号通路的影响程度上曲妥珠单抗是否优于雷帕霉素。方法Her-2过表达的乳腺癌细胞株MDA．MB-453为本实验室保存，使用1640培养基，添加10％胎牛血清，在37℃、5％C02培养箱内培养，根据细胞生长速度适时更换培养基，用0．25％胰蛋白