弓形虫棒状体蛋白rop16的致病机制及tfpi-2与psap相互作用研究

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1、学校代码：10246学号：09211010042硕士学位论文弓形虫棒状体蛋白ROP16的致病机制及TFPI-2与PSAP相互作用研究院系：上海医学院专业：病原生物学姓名：邓奉娥指导教师：毛佐华副教授马端教授王慧君副研究员完成日期：2012年4月16日录中文摘要Abstract第一部分弓形虫棒状体蛋白16的致病机制研究hijm第一节与ROP16结合的人体核蛋白筛选及鉴定一、材料与方法三、讨论第二节ROP16与LMNB1结合及对神经细胞的影响一、材料与方法三、讨论总结与展望参考文献第二部分TFPI-2与PSAP相互作用的研究■、_S-.刖目材料与方法结果讨

2、论总结与展望参考文献……综述发表论文.致谢,英文缩略语注释英文缩写英文全称中文全称R0P16rhoptryprotein16棒状体蛋白16LMNB1laminBl核纤层蛋白B1HIST1H2BhistoneH2B组蛋白H2BDMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜CO-IPco-immunoprecipitation免疫共沉淀HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应EDTAethylenediaminetetraaceticacid乙二胺甲乙酸SDSsodiumdod

3、ecylsulphate十二烷基硫酸钠TEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺PMSFphenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟retinoicacidRA维甲酸PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液ODopticaldensity光密度值CCK-8cellcountingkit-8细胞计数试剂盒FITCfluoresceinisothiacyanate异硫氰酸荧光素PIpropodiumiodide碘化丙啶GFAPglialfibrillaryacidicprotein胶质原纤维

4、酸性蛋白MAP2microtubulin-associatedprotein2微管相关蛋白2signaltransducersandactivatorsSTAT信号转导和转录激活子oftranscriptionTFPI-2tissuefactorpathwayinhibitor-2组织因子途径抑制物-2PSAPprosaposin鞘脂激活蛋白原II中文摘要第一部分弓形虫棒状体蛋白16的致病机制研究刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，可感染几乎所有的恒温动物。近年来，随着城市的发展、人口的增加，宠物饲养队伍不断地扩大，加上忽略饮食卫生等因素，弓形虫感染潜在危险性极度上

5、升。孕妇感染弓形虫后，通常能将这种感染传给胎儿，如果感染发生在胚胎发育早期可导致智障、眼和脑疾病、其它多脏器疾病等严重后果，影响胎儿的发育，导致流产、畸胎、死胎、早产、出生缺陷等先天性弓形虫病。调查显示，我国先天性出生缺陷患儿当中弓形虫的感染率达到22%，弱智和精神病患者的发病与弓形虫感染相关。弓形虫入侵人体细胞过程，棒状体蛋白发挥了极其重要的作用。迄今仅发现两种弓形虫棒状体蛋白可侵入人体细胞核内，分别是棒状体蛋白16(R0P16)和PP2C-Hn。R0P16可快速侵入人体细胞核，业己证明ROP16可影响人体细胞的信号转导和转录激活因子（STAT)信号传导途径从而干

6、扰人体细胞的增殖、分化、凋亡等功能。但该蛋白入核后发挥的具体功能并不知晓。我们的假设是：1、既然R0P16可以进入人体细胞核，对于异源性蛋白入侵，就可影响人体细胞的生理功能；2、既然弓形虫对脑细胞有倾向性，那么侵入脑细胞的弓形虫就可能影响这些细胞的增殖、分化、凋亡等生理功能，同样R0P16入核后，可影响细胞核功能。3、既然弓形虫感染胚胎脑细胞，那么就有可能影响早期大脑的发育。因此我们旨在从R0P16功能的基础研究着手，探索它与人体相互作用的核蛋白，获取下游靶基因的信息从中寻找与生长发育相关的因子，以及R0P16与相互作用的蛋白结合后对其功能的影响，揭示弓形虫脑病的形

7、成以及弓形虫感染导致出生缺陷和智障的机制。本研究工作主要集中于R0P16与人体相互作用核蛋白的筛选和鉴定及蛋白相互作用之后对功能的影响，主要内容及结果如下：(1)成功构建表达R0P16混合克隆细胞株：采用国际公认的弓形虫强毒株RH株感染C57小鼠，待其出现明显的弓形虫感染症状后从中抽取腹水提RNA，RT-PCR扩增目的基因R0P16，构建真核表达载体PEXPR-IBA-105IP-ROP16，重组载体经liP2000瞬时转染入293T细胞，并用噪呤霉素进行筛选得到混合克隆细胞株，Western-Blot检测目的蛋白成功表达。(2)筛选出与R0P16相互作用的人体