超顺磁性氧化铁与荧光染料联合标记骨髓间充质干细胞及生物学特性检测

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1、分类号：R394．2密级：单位代码：10114学号：200930809超顺磁性氧化铁与荧光染料联合标记骨髓间充质干细胞及生物学特性检测研究指导教师：奎毽工申请学位门类级别：医堂亟±专业名称：髭像医堂皇这医堂研究方向：佥王堂速堂二堕部髭堡趁堑所在学院：出耍医型太堂医堂墅堡堂丕2012年3月15日学位论文独创性声明本人赵凌倩声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上己属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人己用于其他学位

2、申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：l、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。⋯者签建遂绣瞧学位论文版权使用授权书本人赵凌倩完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；

3、本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。．日期：型垒年二￡月翌日日期：2Q12年jE月』迎日经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯_⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯II缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯III论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1—1L—JL一日lJ舌⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1资料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7讨论⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24作者简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28山西医科大学硕士学位论文超顺磁性氧化铁与荧光染料联合标记骨髓间充质干细胞及生物学特性检测中文摘要目的：骨髓问充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)已经成为组织工程中重要的的种子细胞，在多种疾病的临床治疗中具有广阔的应用前景。而若想深入研究BMSCs的存活、增殖、分化及在体内的迁移、归巢情况，首先需要解决如何高效、安全地标记BMSCs的问题。本文通过观察SPIO、DAPI和CM．Di

6、I对家兔BMSCs的联合标记效果及其对细胞存活、增殖以及分化的影响，为BMSCs的活体示踪研究奠定理论及实验基础。方法：分离培养家兔骨髓间充质干细胞，用SPIO、DAPI和CM-DiI联合标记后，采用普鲁士蓝染色法检测SPIO标记率，荧光显微镜检测荧光标记率，透射电子显微镜观察细胞的超微结构及SPIO在细胞内的分布，台盼蓝拒染法检测细胞活力，MTT法检测细胞增殖力，并使用地塞米松、胰岛素、3一异丁基一1一甲基黄嘌呤、吲哚美辛体外诱导标记细胞向脂肪细胞分化并用透射电子显微镜鉴定诱导后细胞，使用5一氮杂胞苷体外诱导

7、标记细胞向心肌细胞分化并用免疫荧光鉴定诱导后细胞。结果：SPIO、DAPI和CM．DiI在体外对家兔BMSCs的联合标记率几乎达100％；透射电镜下可见电子密度高的SPIO颗粒主要分布于溶酶体、线粒体内部及胞内其他膜性结构上，细胞核内未见分布，且联合标记BMSCs的超微结构显示清晰、形态保存良好；台盼蓝拒染法显示联合标记BMSCs组的细胞活力与未标记BMSCs组相比差异无统计学意义(P>0．05)；MTT法检测发现联合标记BMSCs组的细胞增殖力与未标记BMSCs组相比差异无统计学意义(P>0．05)；联合标记

8、BMSCs经地塞米松、胰岛素、3一异丁基一卜甲基黄嘌呤、吲哚美辛体外诱导后，透射电镜下可见胞浆内出现脂滴；联合标记BMSCs经5一氮杂胞苷体外诱导后，免疫荧光鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)阳性。结论：SPIO、DAPI和CM-DiI对家兔骨髓间充质干细胞的联合标记率高，并对其存活、增殖以及分化无影响。关键词：骨髓间充质干细胞；超顺磁性氧化铁；DAPI；CM．DiI；标记山西医科大