超顺磁性氧化铁标记对骨髓间充质干细胞多向分化诱导的影响-论文.pdf

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1、第29卷第1期生物医学工程学杂志VO1．29No．12012年2月JournalofBiomedicalEngineeringFebruary2012超顺磁性氧化铁标记对骨髓间充质干细胞多向分化诱导的影响*金旭红杨柳△张寿段小军王富友谭洪波1(中南大学湘雅医学院附属海口市人民医院，海口570203)2(第三军医大学附属西南医院关节外科中心，重庆400038)摘要：研究兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)经超顺磁性氧化铁(SPIO)标记后，体外成骨、成脂及成软骨诱导能力的变化。体外贴壁培养和扩增兔BMSCs，采用SPIO(25~g／m1)联合硫酸鱼精蛋白转染剂标记兔BMS

2、Cs，分别采用适宜的成骨、成脂及成软骨诱导培养液对磁标记BMSCs进行体外定向诱导培养3周，诱导过程中观察细胞形态学变化。3周后对成骨定向诱导组进行钙结节茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)组化染色；对成脂肪定向诱导组行油红一0染色；对成软骨定向诱导组行番红0染色、II型胶原免疫组化染色检测观察胞外基质糖胺多糖、II型胶原的分泌和表达。利用Image-ProPlus图像分析系统对免疫细胞化学染色进行光密度半定量分析。结果表明：超顺磁性氧化铁粒子标记BMSCs后普鲁士染色和电镜检查显示细胞胞浆内含致密铁颗粒；磁标记BMSCs在成骨、成脂及成软骨潜在多向分化诱导能力上与对照

3、组未标记细胞相比无统计学差异。提示，SPIO联合硫酸鱼精蛋白转染剂能成功标记BMSCs，超顺磁性氧化铁标记对兔BMSCs体外多向分化诱导能力无明显影响，合理应用这种新型细胞标记技术将促进对组织工程种子细胞的研究。关键词：超顺磁性氧化铁；骨髓间充质干细胞；细胞多向分化中图分类号R318．0文献标识码A文章编号1001—5515(2012)01—0125—04EffectsofSuperparamagneticIron‘。oxideParticles’-LabelingontheMulti·-diffentiationofRabbitMarrowMesenchymalS

4、temCellinVitroJinXuhongYangLiuzZhangShouDuanXiaojunzWangFuyou2TanHongbo1(AffiliatedHaikouHospitalXiangyaSchoolofMedicineCentralSouthUniversity，Haikou570203，China)2(CenterofJointSurgery，SouthwestHospital，theThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400038，China)Abstract：Theaimofthisstudyw

5、asto1abelrabbitbonederivedmesenchymalstemcells(BMSCs)withsuperpara—magneticironoxideparticles(SPIO)andtostudytheeffectsofmagneticlabelingonthemulti_differentiationofBM-_SCs．RabbitBMSCswereisolated，purified，expanded，thencoincubatedwithSPIO(25~g／m1)complexedtoprotaminesulfate(Pro)transfe

6、ctionagentsovernight．Prussianbluestainingandtransmissionelectronmicroscopywereperformedtoshowintracellulariron．Cel1differentiationwasevaluated．Both1abeledandunlabeledBMSCsweresubjectedtoosteogenic，adipogenieandchondrogenicdifferentiationtOassesstheirdifferentiationcapacityfor21d．Osteog

7、eniccellswerestainedwithalizarinredtorevealcalciumdeposition．adipogeniccellswerestainedwithoi1red一0’respectively．ChondrogeniccellsstainedwithSafranin一0，glycosaminoglycans，andtypeIIcollagenproductionwasassessedbystandardimmunohistochemistry．Cellwithimmunohistochemistrystainingweredete