莪术二酮的代谢及其同源倍半萜的na抑制活性研究

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1、温州医学院硕士学位论文莪术二酮的代谢及其同源倍半萜的NA抑制活性研究姓名：岳磊申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：董建勇2012-05-25温州医学院硕士学位论文莪术二酮的代谢研究及其同源倍半萜NA抑制活性研究中文摘要目的：使用代谢组学方法分析长期口服莪术二酮的潜在肝脏毒性和发生机制；建立莪术二酮药代动力学的LC-MS研究方法，并分析静脉注射莪术二酮的药代动力学特征；筛选莪术二酮及其同源倍半萜的神经氨酸酶(NA)抑制活性。方法：1．雄性SD大鼠(n_8)随机分为给药组与对照组，莪术二酮溶液灌胃给药，每日一次，持续8周，每两周收集一次尿样。8周后处死全部大鼠，收集

2、血浆与肝组织样本。使用IHNMR检测大鼠尿样，NlVIR光谱数据使用主成分分析法(PCA)进行代谢组学分析；血浆样本进行生化分析，肝组织切片进行病理组织学观察。结合三种手段的结论共同探讨莪术二酮对肝组织的毒性作用，分析其毒性作用机制。2．代谢动力学实验动物使用日本雄兔，莪术二酮耳缘静脉注射给药。给药后0，5，10，15，30，45，60，90，120和180分钟时取血，LC-MS分析血浆样本。LC使用ZorbaxSB—C。。(2．1x50mm，3．5um)柱，流动相一乙腈(含0．1％甲酸)梯度洗脱。Ms使用正离子模式，电喷雾离子源；定量采用离子检测，目标碎片离子m／

3、z237(莪术二酮)，内标物ISm／z264(曲马多)。用DAS软件分析药代动力学参数。3．待测化合物先配成浓度为lmg／ml的DM30预制溶液，再稀释成浓度为200¨g／ml，40肛g／ml，8}LgJml的待测溶液备用。96孔荧光酶标板按试剂盒要求加样后放入酶标仪中进行荧光检测，设定激发波长355nm，发射波长440nm。各板设有阳性对照、阴性对照、及空白对照。根据公式计算抑制率，拟合药效曲线，计算其IC50。结果：1．代谢组学研究显示，莪术二酮用药组大鼠尿样中生物标记物的浓度水平发生明显变化，肝毒性标记物TMAO和牛磺酸的浓度水平的显着增加预示着肝损伤的发生，

4、柠檬酸、Q一酮戊二酸等能量代谢中间体浓度水平的变化预示着线粒体功能紊乱。结合血浆生化指标与组织病理学的检验，验证了莪术二酮的肝毒性。温州医学院硕士学位论文2．通过二室模型分析莪术二酮的代谢动力学参数：tv2=44．044-18．97min，MRT(0-t)=23．12士3．53min，MRT(0-1)=27．49土5．98min，C1=0．21士0．04L／min，AUC(0-t)=47，884．624-10，366．81minng／mL，AUC(0-1)--48，705．91+9839．68minng／mL。该法在血药浓度20．4000ng／mL范围内线性关系较好

5、，莪术二酮最低定量限为20ng／mL。平均回收率94．3％．98．4％。日内和日间精密度均低于9％。3．荧光检测结果显示所有11个化合物在200Itg／ml的浓度下对NA的抑制率均在l％以下，可视为各化合物在该浓度下对神经氨酸酶几乎没有抑制作用。结论：1、通过代谢组学的方法证实莪术二酮具有肝毒性，牛磺酸、肌酸、TMAO、琥珀酸、Q一酮戊二酸、柠檬酸、肌酸酐、乳酸等生物标记物在尿液中含量水平在用药期间均发生显著性变化。表明莪术二酮的肝毒性机制是药物活性导致的肝细胞线粒体功能障碍。2．建立了一套简单，灵敏、具体的方法用于检测兔血浆中的莪术二酮。并使用该法完成了莪术二酮的

6、代谢动力学研究。3．检测的，11个倍半萜类化合物在实验条件下没能反映出NA抑制活性，表明这些化合物的抗病毒活性可能通其它机制实现，有待于进一步研究。关键词：莪术二酮；代谢组学；药代动力学；NA抑制筛选温州医学院硕士学位论文MetabolicStudyofCurdione＆TheSesquiterpeneNAInhibitoryActivityScreeningAbstract：Objective：Mechanismoflong-termoralcurdionepotentiallivertoxicitywas’analyzed；LC—MSresearchmethod

7、swasestablishedforthepharmaco—kineticsanalysisofcurdione；Filterwithneuraminidase(NA)inhibitoryactivityofleadcompoundsfrOmtheoilcompositionofCurcuma．Method：1．MaleSDrats(n=8)randomized，curdionesolutionwasadministeredoncedailyfor8weeks．，urinesampleswerecollectedtwiceaweek．Allratsweresac