肝细胞癌分子标志物的筛选及其生物学功能研究

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1、分类号UDC博士学位论文密级肝细胞癌分子标志物的筛选及其生物学功能研究。’。‘andbiol02ica’functionalstudiesofscreeningaIidbiologicalIunctionalstudies一-●■J■●●biomarkersmnepat0CeUUIarcarcmoma作者姓名：乔兵兵学科专业：外科学学院(系、所)：中南大学湘雅三医院指导教师：叶启发教授论文答辩日期型叁!羔26答辩委员会主席中南大学二零一二年五月一奄一一，牛血月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行

2、的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：丝兰。日期：兰竺!主年j月旦日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位

3、论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：盥冱年』月丑Et博士学位论文中文摘要肝细胞癌分子标志物的筛选及其生物学功能研究摘要第一章用蛋白质组学方法筛选肝癌特异性分子标志物目的：采用二维凝胶电泳与基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱(2．DE／MALDI．TOFMS)方法筛选并鉴定肝细胞癌组织(HCC)和癌旁无瘤组织的差异表达蛋白质，并分析其与临床病理学特征的相关性。方法：收集27对肝细胞癌组织和癌旁无瘤新鲜组织，用2．DE技术分离各组蛋白质

4、，考马斯亮蓝染色后用PDQuest图像分析软件识别各差异蛋白质点，应用基质辅助激光解析／电离飞行时间质谱(呲DI．TOFMS)鉴定各差异蛋白质。分别抽提各组织的mRNA和蛋白质，用RT．PCR和Westemblot法，对差异表达蛋白质PRDX3进行转录水平和蛋白质水平的验证。收集119例肝细胞癌组织和36例癌旁无瘤组织病理标本，用免疫组织化学法检测差异蛋白质过氧化物酶3(PRDX3)在各肝癌组织中的表达情况，进一步探讨PRDX3的表达与临床病理学特征之间的相关性。结果：(1)采用2-DE方法筛选到43个差异表达蛋白质

5、点，并用MALDI．TOFMS鉴定了其中22个差异蛋白质，其中15个在HCC中表达上调，它们分别是：亚胺甲基转移酶环脱胺酶，线粒体醛脱氢酶，视网膜脱氢酶1，超氧化物歧化酶【Cu-Zn]，谷胱甘肽．S．转移酶A1，钙调磷酸酶B1，氨基酰化酶．1，T复合体蛋白11样蛋白1，抑素，磺基转移酶1A2，3．巯基丙酮酸硫基转移酶，硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶，人腔钙蛋白，果糖激酶。7个在HCC中表达下调，它们分别是：CAP．Gly结构域连接蛋白4，载脂蛋白A．I，大同源物3，脯氨酰肽基异构酶A，二磷酸核昔激酶A，半胱氨酸蛋白酶

6、抑制因子B。根据其功能，将上述蛋白质进行分类，其中与物质代谢相关的有9个(9／22，40．9％)，与抗凋亡相关的有4个(4／22，18．2％)，与信号转导相关的有7个(7／22，31．8％)，与氧化还原调节相关的有5个(5／22，22．7％)，与细胞骨架相关的有3个(3／22，13．6％)，与解毒作用相关的有2个(2／22，9．1％)，分子伴侣有3个(3／22，13．6％)，与蛋白质水解相关的有1个(1／22，4．5％)，涉及DNA合成和细胞分化的有2个(2／22，博士学位论文中文摘要9．1％)。其中PRDX3蛋白(

7、m／z1462．9，Mascot得分57分，序列覆盖率21％，mass28．02kDa，pI7．67)因在肝癌组织中的表达水平显著高于癌旁无瘤组织，并与肿瘤中氧化应激反应有密切关系，是我们比较感兴趣的一个差异表达蛋白。(2)RT-PCR分析结果显示，PRDX3mRNA在肝癌组织中的表达水平(O．79a：0．14)显著高于癌旁无瘤组织(0．15a：0．05)；Westernblot分析显示，PRDX3蛋白在肝癌组织中的表达水平(O．82：1：0．13)显著高于癌旁无瘤组织(0．52士o．09)，差异具有统计学意义(p<

8、O．05)。(3)免疫组化结果显示，PRDX3蛋白在肝癌组织中的表达(94．9％)高于癌旁无瘤组织及正常组织，并且其表达水平与肝细胞癌的低分化分级有显著相关性(p