白藜芦醇对高糖培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及nf-κb通路的作用

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1、河北医科大学硕士学位论文白藜芦醇对高糖培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及NF-κB通路的作用姓名：王婷申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：赵占胜201203中文摘要白藜芦醇对高糖培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及NF．v,B通路的作用摘要目的：流行病学调查发现，以动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)为基础的大血管并发症是糖尿病(diabetesmellitus，DM)患者死亡的主要原因。据统计，糖尿病患者发生动脉粥样硬化的风险较正常人增加3．4倍。此外，与非糖尿病相比，糖尿病动脉粥样硬化的发病还具有进展快、范围广等特点。因此，目前

2、已将糖尿病看作是动脉粥样硬化的独立危险因素。糖尿病可以加速动脉粥样硬化的进展，但其形成的确切机制尚不完全清楚。目前许多研究表明，血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)异常增殖在糖尿病动脉粥样硬化发生发展中起着重要作用。天然植物成分白藜芦醇(resveratrol，Res)是一种非黄酮类的多酚化合物，存在于葡萄、花生、虎杖等多种植物中，是植物在受到真菌、细菌感染或是在恶劣环境下产生的一种抗毒素。研究发现，白藜芦醇除了具有抗炎、抗衰老、抗氧化应激、抗肿瘤等作用之外，还可以通过抑制血管平滑肌细胞的增殖发挥心血管保护作用。现己证

3、实，NF．r．．B／cyclinDl信号通路在血管平滑肌细胞的增殖中发挥着重要作用，但白藜芦醇是否通过抑制NF．r．．B／cyclinDl途径来抑制平滑肌细胞的增殖还有待进一步研究。本实验以高糖诱导的血管平滑肌细胞为研究对象，观察白藜芦醇对其增殖活性的干预效果，及其与NF．r．B／cyclinDl信号途径之间的关系，为白藜芦醇在糖尿病大血管病变的防治提供理论依据。实验方法：1．采用细胞培养的方法应用大鼠胸主动脉平滑肌细胞株A7r5(细胞株购自中国培养物典藏中心)进行研究。将冻存的血管平滑肌细胞株迅速投入37℃温水中，同时摇动冻存管使快速解冻，解冻后800转／rn

4、in离心5min，弃上清，加入含20％FBS的DMEM培养基5ml混匀，接种于培养瓶中，放于37℃、5％C02孵箱中孵育，待细胞铺满瓶底的90％后进行传代。取处于对数生长期的细胞分别接种于50ml培养瓶和96孔培养板培中文摘要养24小时，后更换于无血清DMEM培养基培养24小时，使细胞处于饥饿状态并同步于G0／Gl期，然后分7组进行实验：①正常对照组(contr01)·5．5mmol／L葡萄糖②高糖培养组(25G)：25mmol／L葡萄糖③甘露醇高渗对照组(Mannit01)：5．5mmol／L葡萄糖+19．5mmol／L甘露醇④高糖+25R组(25G+25Re

5、s)：25mmol／L葡萄糖+25Ignol／L白藜芦醇⑤高糖+50R组(25G+50Res)：25mmol／L葡萄糖+50lamol／L白藜芦醇’⑥高糖+100R组(25G+100Res)·25mmol／L葡萄糖+100“rnol／L白藜芦醇⑦高糖+NF．rd3通路抑制剂组(25G+PDTC)：25mmol／L葡萄糖+30¨mol／LPDTC2．取处于对数生长期的细胞，用MTT法检测不同浓度Res对高糖孵育下VSMCs增殖活性的影响。3．取处于对数生长期的细胞，应用流式细胞技术检测不同浓度Res对高糖孵育下VSMCs细胞周期进程的影响。4．取处于对数生长期的细

6、胞，应用Westernblot技术检测不同浓度Res对高糖孵育下VSMCs细胞总NF．rJ3。、cyclinD1蛋白表达情况。结果：1．用MTT法检测VSMCs的增殖活性，结果显示在高糖诱导下，VSMCs显著增殖(尸

7、IJmol／L)可显著抑制高糖诱导的G0／Gl期向S期转化，G0／Gl期细胞数目增多，S期细胞数目减少(P

8、(尸