大鼠神经元线粒体钙单向转运体对线粒体通透性转换孔的调控作用

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1、青岛大学硕士学位论文大鼠神经元线粒体钙单向转运体对线粒体通透性转换孔的调控作用姓名：于宁申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：王士雷20120602大鼠神经元线粒体钙单向转运体对线粒体通透性转换孔的调控作用摘要目的研究离体大鼠神经元线粒体钙单向转运体对线粒体通透性转换孔的调控作用，初步探讨这种调控作用的可能性机制以及在脑保护中的重要意义。方法使用差速离心法，分离成年雄性g／istar大鼠的大脑皮层线粒体。透射电镜观察分离的线粒体形态，并分别检测线粒体内膜和外膜标志酶——琥珀酸脱氢酶和单胺氧化酶的活性，以确定分离的线粒体具有正常的形态与活性。使用线粒体肿胀

2、法测定线粒体通透性孔的开放程度，分别使用线粒体钙单向转运体抑制剂钌红，激动剂精胺和线粒体通透性转换孔抑制剂环孢菌素处理分离的线粒体，观察吸光度的连续变化。同时观察各实验组线粒体处理之后的电镜形态。结果与对照组相比，钌红(5pmol／L)使吸光度降低程度与速率咀显减小，而精胺(100Pmol／L)使吸光度降低的程度与速率进一步增大，但是环孢菌素A(2IJmol／L)能够减弱精胺的这种作用。在透射电镜下可以看到，钌红处理后的线粒体肿胀程度明显比对照组轻，精胺处理之后的线粒体肿胀最为明显，而环孢菌素A和精胺联合处理的线粒体，肿胀程度比精胺组轻。结论在离体大鼠大脑

3、皮层线粒体中，线粒体钙单向转运体可能对线粒＼‘＼删嬲体通透性转换孔有调控作用，这种调控机制在脑缺血再灌注脑保护过程中发挥作用。关键词：线粒体：钙单向转运体：通透性转换孔；细胞死亡；脑保护ThecalciumuniporterregulatesthepermeabilitytransitionporeinisolatedcorticalmitochondriaAbstractObjectiveTodeterminewhetherthemitochondrialcalciumuniporterplaysaroleonthemitochondrialpermea

4、bilitytransitionporeinisolatedratbrainmitochondria．MethodsMitochondriawereisolatedfromadultmaleWistarratsaccordingtoastandarddifferentialcentrifugationprocedure．Ultrastructuralexaminationofisolatedmitochondrialpreparationswa$performedusingtransmissionelectronmicroscopy．Mitochondri

5、alpermeabilitytransitionporeopeningwasdeterminedbymitochondrialswelling．Isolatedmitochondriaweretreatedwithmitochondrialcalciumuniporterinhibitorrutheniumred，activatorspermine，andmitochondrialpermeabilitytransitionporeinhibitorcyclosporinAseparately,observingthecontinuouschangeina

6、bsorbance．Atlast，observingthemitochondrialmorphologyofeachgroupusingtransmissionelectronmicroscopy．ResultsTreatmentwithrutheniumred(5lamol／L)，theextentandrateofdeclineintheabsorbancewereattenuated．Spermine(100Itmol／L)muchmoreenhancedtheextent砒ldrateofdecline，whilecyclosporinA(2lam

7、ol／L)reversedthiseffect．Followingtransmissionelectronmicroscopy,thedegreeofswellingintherutheniumredgroupWasattenuatedcomparedwiththecontrolgroup，sperminegroupWasthemostsevere，however,cyclosporineAplussperminegroupwasslighterthanthesperminegroup．ConclusionTheseresultsindicatethatt

8、hemitochondrialcalciumuniporterpl