缺氧对小鼠脑离体线粒体通透性转换孔的影响

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1、温州医学院硕士学位论文缺氧对小鼠脑离体线粒体通透性转换孔的影响姓名：孙丽娜申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：王小同2012-05-23缺氧对小鼠脑离体线粒体通透性转换孔的影响中文摘要目的：探讨缺氧对小鼠离体脑线粒体通透性转换孔(mitochondrialpermeabilitytransitionpore，MPTP)和氧化应激的影响，寻找缺氧所致脑损害的发病机制，为其治疗提供理论依据。方法：SPF级C57BL／6雄性小鼠40只，7-9周龄，体重23-289。随机分成2组(缺氧组、常氧组)，每组20只。颈椎脱臼处

2、死后，冰上钝性分离取全脑，剪碎后移入玻璃匀浆器匀浆，在4℃用梯度离心法提取线粒体。电镜检验线粒体，二喹啉甲酸(Bicinchoninicacid，BCA)法蛋白定量，调整浓度为5mg／ml的线粒体悬液。缺氧组线粒体悬液中通入100％N2和氧清除剂Na2S204O．5mM(致P02检测不到)，37。C水浴30min。常氧组线粒体悬液置于空气中，其余条件与缺氧组相同。电镜观察线粒体超微结构，荧光分光光度计检测线粒体膜电位，酶标仪测线粒体通透性转换孔开放情况，酶联免疫吸附分析(enzyme．1inkedimmunosorbe

3、ntassay，ELISA)测定线粒体释放的细胞色素C(cytochromeC，CytC)，比色法检测超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)与谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量。结果：1．缺氧对线粒体超微结构的影响：常氧组线粒体为圆形或椭圆形，线粒体脊清晰，排列较整齐，双层膜结构较完整。缺氧组线粒体空泡变性较明显，大多数嵴断裂溶解，双层膜结构不完整，外层膜破损现象易见。2．缺氧对线粒体通透性转换孔的影响：与常氧组吸光比值(0．94+

4、0．04)相比，缺氧组线粒体吸光值比值(0．67+0．11)显著下降，体积明显膨胀，即MPTP开放增加，差异有统计学意义(尸

5、．缺氧对线粒体SOD、GSH、MDA的影响：与常氧组(13．24+0．30)U／mg相比，缺氧组(9．41+1．38)U／mg线粒体SOD活性显著下降，差异有显著统计学意义(P<0．01)。与常氧组(2172．544-171．82)g／L相比，缺氧组(12．074-2．21)g／L的GSH含量下降，差异有显著统计学意义(P<0．01)。与常氧组(4．434-0．29)nmol／mg相比，缺氧组(9．264-0．87)nmol／mg的MDA含量增多，差异有显著统计学意义(P<0．01)。结论：1．缺氧导致脑离体线粒体体积

6、膨胀，嵴断裂；说明缺氧可引起线粒体结构41：3审捩舌o2．缺氧导致脑离体线粒体膜上的MPTP开放增强，膜电位下降，CytC释放增加，提示缺氧可能通过增加MPTP开放，降低膜电位，致线粒体内凋亡因子如CytC释放到胞浆增多，最终导致线粒体损害。3．缺氧导致脑离体线粒体中SOD、GSH减少，MDA增多；提示缺氧可能通过减弱抗氧化防御系统和增强线粒体脂质过氧化作用从而造成氧化应激损伤。4．从离体线粒体水平提供了缺氧所致线粒体功能障碍的可能病理生理机制。关键词：缺氧；线粒体；线粒体通透性转换孔；膜电位；细胞色素C；氧化应激；离

7、体实验；小鼠EffectsofHypoxiaontheMitochondriaPermeabilityTransitionPoreinisolatedMiceBrain【ABSTRACT】objective：Toinvestigatetheeffectsofhypoxiaonthemitochondriapermeabilitytransitionpore，thechangeofCytochromeC，mitochondriamembranepotentialandoxidativestressinisolatedmi

8、cebrainmitochondria，todelineatetheconceivablemolecularmechanismsMethods：FortyC57BL／6malemice，from23to269，werekilledbycervicaldislocationandthebrainswereimmediatelyrem