低蛋氨酸饮食对ibd大鼠紧密连接蛋白表达和功能的影响

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1、浙江大学硕士学位论文低蛋氨酸饮食对IBD大鼠肾密连接蛋白表达和功能的影响姓名：饶艳霞申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：陈洁20120517浙江大学硕士学位论文中文摘要低蛋氨酸饮食对IBD大鼠紧密连接蛋白表达和功能的影响浙江大学医学院儿科学硕士研究生饶艳霞导师陈洁主任医师中文摘要炎症性肠病(innammato巧boweldise鹤e，IBD)存在肠黏膜屏障功能受损，是IBD的潜在致病因素，并增加IBD复发的风险。所以，维持和恢复肠黏膜屏障功能将有利于提高肠道黏膜的防御功能，维持肠黏膜免疫稳定，同时促进肠黏膜修复有助于维持缓解、减少疾病复发。近30年国内外对

2、低蛋氨酸(methiomneresmction，MetR)饮食的研究中发现MetR饮食调节生物体线粒体的功能，减少活性氧的产生，降低对大分子物质的氧化应激损伤，进而减少内源性损伤以及增强大分子物质抗氧化能力。低蛋氨酸处理的LLC．PK细胞和MetR饮食处理的SD大鼠细胞旁路通透性降低，细胞以及大鼠肠上皮屏障功能增加，上皮紧密连接蛋白的表达改变。最近一项单中心临床试验中发现MetR饮食有利于缓解CD患者的CDAI评分，由此我们推测：MetR饮食可能通过改变IBD肠上皮紧密连接的表达，降低肠黏膜通透性，从而修复肠黏膜屏障功能，促进炎症缓解。目的：研究Me依饮食对I

3、BD大鼠肠黏膜病理变化、肠上皮通透性以及肠上皮紧密连接蛋白表达的影响，探讨IBD患者应用MetR饮食促进和维持缓解的可能性。方法：雄性Sprague．Dawley(SD)大鼠90只，全氨基酸饮食饲养(含蛋氨酸O．87％)，不限饮食，随机分为Dss组(n=48)和对照组(n=42)，第7天按照DAI评分评估，以DAI>2．6，持续便血2天为条件筛选动物到下一步实验．按照是否MetR饮食(含蛋氨酸O．17％)，将DSS组和对照组分为：DSS+Me氓，DSS+从，M稂，从组，每组15只．第21天腹主动脉血分析血常规和肝肾功能、电解质，取肠组织，HE染色分析肠黏膜病理

4、变化，检测肠组织MPO活性，PCNA免疫组¨浙江大学硕二L学位论文中文摘要化染色分析肠上皮细胞的增殖状况，采用UssingCh锄ber检测肠上皮细胞跨膜电阻抗，短路电流，跨膜电势差；通过RT-PCR、免疫组化和westemBlot从转录水平和翻译水平，以及蛋白的空间表达位置分析肠上皮紧密连接蛋白的表达。结果：①经DsS处理后大鼠全部出现腹泻、便血、体重下降，HE染色第7天表现为肠上皮隐窝扩张、溃疡，炎症细胞的浸润尚未及肌层；第14天表现为透壁炎症细胞浸润、肠上皮糜烂、广泛溃疡；第21镜下观察可见隐窝扩张、糜烂、糜烂上皮的周围的可见多个淋巴滤泡增生。②MetR组

5、大鼠同从组比较，体重下降28％(n=15，P

6、异；DsS+MetR组肠上皮跨膜电阻抗与电势差与DsS+从没有显著差异(扁，芦O．93)，但检测到DSS+Me依组大鼠短路电流值较DSS+从组显著降低(n=6，户=O．036)。⑤组化PCNA染色结果提示DsS处理后结肠上皮细胞增生，MetR与从组大鼠PCNA阳性率没有差异，DSS+MetR组大鼠PCNA阳性率稍高于DSS+从组，没有显著差异(n=9，芦O．434)⑥DSs处理大鼠肠上皮紧密连接蛋白mlⅢA表达显著下降，同AA组比较，MetR组肠上皮Dcc肠讲丹．c肠“疥甩3．c肠“击，z5mRNA表达水平增加；与DSS+AA组比较，DSS+MetR组Dcc肠

7、硪以mRNA表达量增加1．69倍(n=9，，I=O．055)，c肠“讲力3mI：ⅢA表达水平增加2．05倍(n=9，P=O．026)，claudin2RNA的表达水平降低的1．84倍(n=9，，．=O．03)，cz口“扰甩J、c肠“讲刀4、c肠“讲以5、c肠“讲，17、zD．JmRNA差异不明显。⑥免疫组织化学提示DSS处理组claudin2，claudin3，occludin，ZO．1荧光连不连续，断裂，隐窝扩张，DSS+MetRclaudin3荧光强度显著高于DSS+从组，claudin2荧光强度较DSS+从组弱，余未见明显的差别。⑦westemblot结

8、果显示MetR肠上皮claudin3蛋