αvβ受体放射性配体99tcm-tp1326的制备、鉴定及其动物体内实验研究

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1、第三军医大学硕士学位论文αvβ受体放射性配体99Tcm--TP1326的制备、鉴定及其动物体内实验研究姓名：查林申请学位级别：硕士专业：影像医学与核医学指导教师：李前伟201205第三军医大学硕士学位论文Qvp3受体放射性配体99Tcm-TPl326的制备、鉴定及其动物体内实验研究摘要研究背景及目的血管生成(angiogenesis)是指由多种因子共同参与，在原有血管网的基础上通过内皮细胞芽生出新生血管的复杂过程，在肿瘤的生长、侵润和转移过程中发挥重要作用。其中，整合素在肿瘤组织新生血管内皮细胞的表达与肿瘤血管生成密切相关。整合素是细胞黏附分子家族的重要成员之一，是由一

2、条旺链和一条p链以非共价键链接而成的异二聚体，以跨膜蛋白形式广泛分布于细胞表面，主要介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质问(extracellularmatrix，ECM)的黏附。迄今已发现18种13,亚单位和8种D亚单位，以及由不同亚单位组成的20余种整合素，其中整合素0L。B3(a。133受体)在介导血管内皮细胞与肿瘤细胞的黏附、参与肿瘤血管生成、促进肿瘤生长和转移等方面发挥重要作用。旺，p，受体的表达具有一定特异性，它在成熟血管内皮细胞中很少表达，但在肿瘤组织新生血管内皮细胞和部分肿瘤细胞表面呈高水平表达，使其成为抑制肿瘤血管生成研究的新靶点。研究发现，含精氨酸一甘氨

3、酸一天冬氨酸(Arg—Gly—Asp，RGD)序列的小分子多肽是一类高效仅。13，受体拮抗剂，能够选择性抑制培养肿瘤细胞的增值和肿瘤组织的生长，其中含两个二硫键的RGD多肽对肿瘤血管生成的抑制率最高。目前，用于治疗恶性肿瘤的整合素抑制剂中，部分含RGD序列的小分子多肽已进入III期临床实验。利用放射性核素标记含RGD序列的小分子多肽来实现O【。p3受体显像及核素靶向治疗已成为肿瘤分子核医学的研究热点之一。本研究通过多肽化学合成技术对自行设计的环形RGD九肽(RGD一4CK)进行甘氨酸一丙氨酸(D)一甘氨酸一甘氨酸-Y氨基丁酸[GA(D)GG—Aba]修饰，探讨99Tcm

4、标记GA(D)GG—Aba—RGD一4CK(TPl326)的最佳条件、标记物的理化与生物学性质、正常动物体内示踪动力学及组织动态分布特点、荷瘤裸鼠体内肿瘤显像与竞争结合显像，为以整合素a，133为靶点的受体显像研究奠定基础。研究方法1．99Tcm-TPl326的制备：化学合成制备TPl326，并以氯化亚锡为还原剂进行99Tcm7第三军医大学硕士学位论文标记，纸层析法测定标记率并计算比活度。2．99TCm-TPl326的理化与生物学性质鉴定：通过体外稳定性实验、HPLC分析、血清蛋白结合实验和油／水分配实验，鉴定标记物的理化与生物学性质。3．健康大耳兔体内示踪动力学实验：

5、取9只健康雄性大耳兔，经耳缘静脉注射200}t1(37MBq)卿Tcm-TPl326溶液，分别于1．5、3、5、10、30、60、120、240、480min从对侧耳缘静脉采血、称重，1，计数仪测量放射性计数(cpm)，经测量效率校正后计算血液放射性浓度(kBq／L)。通过药代动力学分析软件DAS3．1．0对房室模型进行综合分析、判断，得出最佳房室模型、拟合曲线及示踪动力学参数。4．健康大耳兔SPECT显像研究：将健康雄性大耳兔仰卧位固定于实验台上，探头视野中心对准兔胸腹部。经耳缘静脉注射200I．d(74MBq)”Tcm-TP1326溶液，立即以1帧／s采集1min，

6、1帧／min采集59min，并于1．5、2、2．5、3、4h分别预置计时1．06min、1．12min、1．19min、1．26min、1．42min采集1帧图像，定性观察各主要组织器官的放射性动态分布变化。5．健康小鼠体内分布实验：将7．4MBq标记物定容至500ml，混匀后向5支放免试管中分别加入1ml溶液，测量其放射性(cpm)，将放射性计数平均数乘以500，即为参考源的放射性计数。按随机数字表法将35只健康昆明小鼠分为7组，每组5只。经尾静脉注射标记溶液200“1(7．4MBq)，分别于1、5、10、30、60、120、240min处死，收集血液、心、肺、肝、肾

7、、肠、肌肉、骨、脑，分别称重并测量其放射性，经参考源校正后计算每克组织百分注射剂量率(％ID／g)。绘制体内放射性分布图。6．荷瘤裸鼠显像研究：将荷人黑色素瘤B16裸鼠仰卧位固定，经尾静脉注射标记溶液100I，tl(7．4MBq)。分别于30、60、90、120、180及240min经时间衰减校正后各预置计时采集1帧，观察荷瘤裸鼠体内肿瘤组织及其他组织器官放射性的动态分布变化，利用ROI技术测定肿瘤与对侧软组织的T／NT放射性比值。7．荷瘤裸鼠竞争结合显像研究：基本实验方法同上，不同的是先经荷瘤裸鼠尾静脉注射300倍非标记TPl326(1