锝标记的反义药物的制备与动物体内研究

《锝标记的反义药物的制备与动物体内研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、铸标记的反义药物的制备与动物体内研宄1.*河北医科大第一医院核医学科石家庄0500812.*河北医科大第二医院核医学科石家庄0500003.四川大学华丙医院核医学科成都610041【摘要】目的制备脂质体包裹胞嘧啶(CytosineC)鸟嘌呤(GuanineG)含量低离启动子位置较近的99Tcm–HYNIC(联餅尼克酰胺)–survivinASODN(Antisenseoligodeoxynucleotide反义寡脱氧核苷酸)，行荷人肝痛SMMC-7721裸鼠体内分布研究，

2、探讨此反义药物制备过程及动物体内的分布，筛选出最佳反义制剂碱基序列，提高诊断和治疗效果。方法以survivin为靶序列制备G、C含量均为10%的20个碱基单链ASODN和SODN,偶联HYNIC，99Tcm标记后经CellufineGH-25纯化后脂质体包裹。对荷瘤裸鼠行生物学分布，ASODN和SODN两组计量资料比较均通过SPSS13.0统计软件，所有数据均采用均数标准差，用两样木t检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果：此反义药物经优化筛选序列，HYNIC耦联，99Tcm标记-脂质体包裹

3、-cellufineGH-25纯化后稳定性较好，在血清中培育前后标记率无明显变化，放化纯均可高达95%。在4h时荷瘤鼠内肝、肾％旧尨值分布相对较低分别为肝内ASODN,2.470.02;SODN,2.050.04；肾内ASODN,1.500.06;SODN,1.960.03；T/NT值ASODN$交高为4.730.02;SODN为1.480.03二者差异有统计学意义(t=3.622p<0.05)o结论：反义序列的选择是反义药物制备的关键，该研究使用全长基因寻靶技术并使G、C含量少、离启动子

4、位置近的碱基序列制备出的反义药物K有肿瘤聚集率高，副作用少的优点，可进一步指导临床，提高诊断与治疗效果，减少副作用。【关键词】锝标记；反义药物；制备；动物实验目前恶性肿瘤发病率日趋增高，迄今诊断及治疗恶性肿瘤的方法很多其中反义药物与靶序列的结合只有特异性，能提高恶性病变诊断效率，故反义探针的制备很关键［1］。国内外有关肿瘤反义显像及反义治疗的文献报道多数由于效果差及副作用难以在临床上广泛应用，为了提高显像与治疗效果，减少副作用，需要优化反义药物，笔者己研宄证实了反义寡核苻酸中G启动子位置［2］和

5、C等碱基在体内影响肿瘤特异性聚集。通过在体外筛选到的最佳靶点制备出的反义寡核苻酸在体内可能由于非特异性作用而失去了最佳显像及治疗效果，并且可能会引起肾损害等副作用，为了克服上述缺点，笔者将优化反义药物的制备过程阐述如下。1.材料与方法1.1实验动物与人肝癌细胞株SMMC-7721BALB/C雄性裸小鼠20只，4周龄，体重15~18克，购于中国药品生物制品检定所实验动物中心，合格证号：0158085，饲养于白求恩国际和平医院实验动物中心。人肝癌细胞株SMMC-7721购自中国科学院典型培养物保藏委

6、员会细胞库/中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。1.2人SMMC-7721肝癌裸鼠模型的制备用无菌注射器抽取人SMMC-7721肝癌细胞悬液7×106/0.2ml，接种于健康BALB/C裸小鼠右侧髂窝皮下，并在SPF环境继续饲养6〜8w后，待肿瘤直径达0.8cm~1.0cm时，选取生长良好大小无显著性差异的荷瘤小鼠进行实验。1.3主要仪器与试剂主要仪器:美国GE公司产InfiniavcHawkeyeSPECT/CT显像仪,C18反向层析柱北京师范大学化学学院陆洁博士赠予,Cel

7、lufineMini-Column及Chisso纤维素基凝胶填料CellufineGH-25由北京慧德易公司提供，N-1001旋转蒸发仪产于上海爱朗仪器冇限公司。Scl-IOAVP型HPLC仪，PackardBiosciencecompany。试剂:ASODN、SODN上海生工公司提供，HYNIC北京师范大学化学学院陆洁博士赠予，脂质体Lipofectamine2000为美国Invitrogen公司产品。99Mo-99Tcm发生器中国原子能科学研究院提供。其他试剂由河北医科大第一、二医院核医学科

8、实验室提供。1.4脂质体包裹99Tcm-HYNIC-DNA的制备survivinASODN的靶序列的选择：先通过全长基因寻靶技术［3】经细胞学验证后筛选出12条20mer的序列。我们曾对G及与启动子相对位置是否影响反义寡核苻酸的非特异性聚集进行研宄发现G含量越高，离启动子距离越远非特异性聚集率越高。之后对C研究中发现胞嘧啶含量越高，非特异性聚集越明显,主要表现在双肾内放射核素浓聚水平越高。故我们最后选择离启动子位置近，G/C含量相对较低的1条序列来制备显像剂。序列正义链SODN(596-615)