体内药物分析 生物样品与样品制备

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1、第一节生物样品的种类、采集、制备与贮存一、生物样品的种类、采集和制备第三章生物样品与样品制备1体内药物分析采用的生物样品包括各种体液和组织，常用的是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等样品。其中最常用的是血浆或血清，因为它们可以较好地体现药物浓度和治疗之间的关系。2（一）血液1.血样的采集供测定的血样应能代表整个血药浓度，因而应待药物在血液中分布均匀后取样。动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。对于病人，通常采取静

2、脉血。当血药浓度高和分析方法灵敏时，也可从毛细管（手指、耳垂、脚趾）采少量血。3测定血中药物浓度，通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，而不是指含有血细胞的全血中的药物浓度。一般认为，当药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度与药物在作用点的浓度紧密相关，即血浆中的药物浓度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作为作用部位药物浓度的可靠指标。4药物动力学参数测定中常用的取样次数见示意图：5（1）血浆(plasma)的制备：血液置含有抗凝剂（如：肝素、草酸盐等）的试管中，混合后，离心，分

3、离血细胞，淡黄色上清液即为血浆。肝素是一种含硫酸的粘多糖，常用其钠盐、钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白。一般1ml的全血需加0.1—0.2mg的肝素。加入血样后立即轻轻旋摇，但勿太猛烈，以免导致血细胞破裂。6(2)血清的制备采集的静脉血液置试管中，放置30min到1h，由于激活了一系列凝血因子，血中的纤维蛋白原形成纤维蛋白，血液逐渐凝固，离心后上层澄清的淡黄色液体即为血清。7血浆比血清分离快，而且制取的量约为全血的50%～60%（血清只有30%～40%），多数研

4、究者喜用血浆进行分析测定。若血浆中含有的抗凝剂对药物的测定有影响，则应使用血清样品。血浆只比血清多含一种纤维蛋白原，而血纤维蛋白几乎不与药物结合，因此两者的药物浓度是一样的，且测定血药浓度的方法也是通用的。注意：血浆或血清有溶血时可能会影响测定药物不稳定时，用血浆更好8（3）全血的制备采集的血液置于含有抗凝剂的试管中，轻轻混匀，不离心，防止凝血，保持血浆和血细胞混合在一起。需要测全血中血药浓度的情况：测定平均分布于血细胞内、外的血药浓度血浆药物浓度波动大，且难以控制血浆药物浓度太低9（

5、二）尿液尿药测定的目的与血液、唾液样品不同，主要用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度的研究，并可推断患者是否违反医嘱用药，预测药物的代谢过程及测定代谢类型体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物（conjugates）等形式排出。10尿液中药物浓度较高，收集量可以很大；因属于非损伤性采样方式，收集方便。但由于易受食物种类、饮水多少、排汗情况等影响，并且在尿液排出过程中，不仅包括肾小球的滤过，还包括肾小管的重新吸收，因此，尿药浓度变化较大，与血药浓度的相

6、关性很不理想。11尿药浓度变化大，应测定一定时间内排入尿中药物的总量。健康人排出的尿液是淡黄色或黄褐色，成人一日的排尿量为1-5L，尿液的密度为1.105—1.020，PH值在4.8—8.0之间。放置后会析出盐类，并有细菌繁殖、固体成分的崩解，因而使尿液变浑浊。由于这些原因，必须加入适当的防腐剂保存。动物试验中用代谢笼收集尿、粪，只能以时间段采集，有时会有收集不到的情况。12尿样优点：容易获得，属非损伤性取样，且样品量大；尿中药物浓度高，含有缀合物或代谢物，是研究代谢物结构的首选样品；蛋白含量极低

7、，不需去蛋白处理。缺点：与血药浓度不相关，难以反映药物作用过程；受肾功能、pH影响；难以定时定量取样，易污染；所含成分复杂，已知其中有紫外吸收的化合物就达数十种。尿样测定多用于药物排泄、生物转化研究。13（三）唾液唾液是无损伤性采样，易收集。一些药物的唾液药浓（S）与血浆游离药浓(P)密切相关，因此，在TDM中可利用测定S代替P监测；唾液样品也可用于药代动力学研究。14腮腺分泌水、淀粉酶舌下腺、颌下腺分泌粘液和浆液质的混合液唾液分泌量1200ml蛋白含量为血浆的十分之一PH6.2-～7.4，变化大

8、15唾液的采集应尽可能在刺激少的安静状态下进行。一般在漱口后15min收集，至少采集10min。采集混合唾液也可用物理或化学的方法刺激，在短时间内得到大量的唾液。非刺激法条件下唾液直接流入容器内，流速慢，仅约0.05mL/min。物理刺激法唾液分泌流速为1～3mL/min;化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱刺激唾液分泌，流速可达5～10mL/min。唾液的采集16Crouch研究发现：采集方法对唾液中药物浓度有显著影响，实验证明唾液中可待因的平均浓度在非刺激条件下比酸刺激条件下