trpc3、trpc6在结节性硬化症癫痫患者皮层病灶中的表达

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1、第三军医大学硕士学位论文TRPC3、TRPC6在结节性硬化症癫痫患者皮层病灶中的表达姓名：赵湧频申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：陈康宁201205第三军医大学硕士学位论文TRPC3、TRPC6在结节性硬化症癫痫患者皮层病灶区中的表达摘要研究背景结节性硬化症(tuberoussclerosiscomplex，TSC)是一种常染色体显性遗传性疾病，临床主要表现为癫痫、智力低下和皮脂腺腺瘤(Vogt三联征)，并有超过l／3的患者发展为药物难治性癫痫。TSC癫痫患者皮质发育病灶区及皮质结节区出现特征性的异构神经元(Malformedneurons，MNs)，如异形神经元(Dysmorp

2、hicneurons，DNs)和巨形细胞(Giantcells，GCs)，是其脑损害最典型的病理性标志。过去临床电生理研究发现这两类细胞可能做为TSC病灶癫痫发作的起搏点，而其参与癫痫发作的主要机制目前尚未阐明。传统型TRP通道(CanonicalTRP，TRPC)作为一类可调节细胞内钙离子浓度的非选择性阳离子通道，其在癫痫发作中的作用倍受关注。TRPC通道在哺乳动物的中枢神经系统中有很高的表达，参与了细胞膜受体激活磷脂酶C后所介导的钙离子内流，并有研究发现在TSC致痫病灶区的细胞中存在钙离子内流而引起的神经元电活动异常。前期有研究发现，TRPC通道的部分亚型(TRPC3、TRPC6)在

3、FCD的致痫病灶中表达显著上调，并且主要分布在与FCD癫痫发作相关的特征性神经元_‘‘异构神经元”上。而TCS和FCD具有相似的组织病理学特征，即出现异构神经元(MNs)．包括异形神经元(DNs)和巨形细胞(GCs)。据此推测，TRPC3、TRPC6通道可能在TSC致痫病灶中表达异常，并可能与TSC导致的癫痫发作密切相关，而相关研究还少见报道。为此，本研究采用Westernblot、免疫组化及免疫荧光双标首先检测TRPC3、TRPC6通道在非结节性硬化、非癫痫患者的正常皮层脑组织中的表达情况，并与之做对照，观察TRPC3、TRPC6通道在结节性硬化症癫痫患者病灶皮层中的表达变化及分布情况

4、，旨在探讨TRPC通道在癫痫发作中的可能作用，为揭示TRPC通道与TSC致痫之间的关系提供重要的理论依据。目的TRPC3、TRPC6通道在TSC癫痫患者皮层脑组织的表达与分布，探讨TRPC3、TRPC6通道参与结节性硬化导致癫痫发作的可能机制。4第三军医大学硕士学位论文方法收集自2008年6月至2010年12月手术切除并经病理检测证实是TSC癫痫患者的皮层脑组织标本26例，与10例正常对照皮层脑组织(controlcortex，CTX)作比较，采用Westernblot、免疫组化及免疫荧光双标方法定性、定量检测TRPC3、TRPC6在对照皮层脑组织与TSC癫痫患者皮层病灶脑组织的表达分布

5、情况。结果1．Westernblot蛋白检测结果显示：在对照皮层脑组织(CTX)中，TRPC3、TRPC6分别在相应的分子量91KDa及94KDa处有特异性蛋白条带，从蛋白水平证实正常脑组织中表达TRPC3、TRPC6；在TSC皮层结节脑组织中，TRPC3、TRPC6分别在相应的分子量91KDa及94KDa处有特异性蛋白条，与CTX相比，TSC组TRPC3、TRPC6条带与内参GAPDH条带灰度值之比显著增高，差异具有统计学意义(P

6、X明显增强(尸<0．05)，TRPC3、TRPC6高度表达于TSC皮层结节脑组织中具有特征性的异构神经元(MNs)上，包括异形神经元(DNs)和巨形细胞(GCs)；3．免疫荧光双标结果显示：TRPC3、TI冲C6阳性的M-Ns与神经元标志物NeuN、NF．200均存在共表达，TRPC3、TRPC6表达阳性的胶质细胞与Vimentin共表达，但未观察到TI心C3、TRPC6表达阳性的DNs及GCs与胶质细胞标志物GFAP、Vinmentin共表达。结论TRPC3、TRPC6在结节性硬化症癫痫患者致痫病灶皮层中表达上调，以及特异性的细胞分布模式，提示TRPC3、TRPC6通道可能与TSC癫痫

7、发作密切相关。关键词：瞬时受体电位通道蛋白C3(TRPC3)；瞬时受体电位通道蛋白C6(TRpC6)；结节性硬化症(TSC)；癫痫；异构神经元(MNs)——第三军医大学硕士学位论文————————————————————————————二—二_-二二二—二_二二二=l二二一．TheexpressionofTRPC3andTRPC6intheepilepticcortexinpatientswithtuberoussclerosisc