stathmin表达沉默鼻咽癌细胞株的建立及其生物学特性初探

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1、分类号R36学校代码10601密级公开编号Y0901007硕士学位论文Stathmin表达沉默鼻咽癌细胞株的建立及其生物学特性初探学科专业:病理学与病理生理学研究方向:肿瘤生物学研究生姓名:范才文学号:Y0901007学位类型科学学位导师姓名:向秋教授二O一二年五月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志

2、对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国

3、科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日目录Stathmin表达沉默鼻咽癌细胞株的建立及其生物学特性初探…………1中文摘要……………………………………………………………………1ABSTRACT…………………………………………………………………2英汉缩略词对照表………………………………………………………4前言……………………………………………………………………

4、……51材料与方法………………………………………………………………71.1实验材料与仪器………………………………………………………71.2实验方法……………………………………………………………102结果……………………………………………………………………243讨论……………………………………………………………………304结论……………………………………………………………………33参考文献…………………………………………………………………33综述………………………………………………………………………37攻读学位期间发表的学术论文目录………………………

5、……………48致谢………………………………………………………………………48Stathmin表达沉默鼻咽癌细胞株的建立及其生物学特性初探中文摘要目的：构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体，建立stathmin表达沉默鼻咽癌5-8F细胞株，探讨stathmin沉默对鼻咽癌5-8F细胞的增殖、周期和成瘤性的影响，为鼻咽癌的基因治疗提供实验依据。方法：（1）合成stathmin特异性siRNA片段，片段插入pGenesil-1.1质粒表达载体构建重组质粒表达载体。（2）重组质粒表达载体转染，RT-PCR和Westernblotting鉴定，建

6、立stathmin稳定抑制表达5-8F细胞株。（3）MTT实验分析细胞的增殖，流式细胞仪分析细胞的周期。（4）裸鼠移植瘤实验分析肿瘤细胞的成瘤性。结果：(1)获得了stathminsiRNApGenesil-1.1重组质粒表达载体和stathmin沉默的鼻咽癌5-8F细胞株。（2）Stathmin沉默5-8F细胞株孵育48、72和96h，细胞增殖抑制率分别为（33.67±2.52）%，（28.33±1.15）%，（31.67±1.53）%，与阴性对照组分别为（8.13±0.60）%，（3.20±0.53）%，（3.97±0.15）%和空白对照组（0

7、）比较，差异有显著性(p＜0.01)。（3）Stathmin沉默组G2期细胞为（15.8±0.55）%，与阴性对照组（11.3±0.79）%和空白对照组（10.9±0.92）%比较，差异有显著性（P＜0.05）。（4）Stathmin沉默组，裸鼠移植瘤重量为（0.32±0.21）g，与阴性对照组（1.10±0.40）g和空白对照组（1.52±0.30）g比较，差异有显著性（P＜0.05）。结论：（1）成功构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体。（2）建立了stathmin稳定抑制表达的5-8F细胞株。（3）Stathmin沉默抑制5-8F

8、细胞的恶性生物学表型。关键词：鼻咽癌；5-8F细胞；stathmin；沉默；RNA干扰1ESTABISHMENTOFSTA