p13kakt通路在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用

《p13kakt通路在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学博士学位论文P13K/Akt通路在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用姓名：邢玲玲申请学位级别：博士专业：病理学与病理生理学指导教师：段惠军201204中文摘要P13K／Akt通路在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用摘要目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病主要的微血管并发症之一，在西方国家已成为导致终末期肾衰的首要原因，在我国其发病率和在慢性透析性肾病中所占的比例也在不断增加。探讨其发病机制、寻求有效的防治措施对广大DN患者具有重要意义。DN的发病机制十分复杂，涉及到糖脂代谢紊乱、血流动力学异常、炎症介质释放、细胞因子、氧化应激以及细胞凋

2、亡等多因素的作用。近年来，随着足细胞系的建立及生化技术的发展，对足细胞的认识和研究逐渐深入，足细胞损伤在DN发病中的作用得到认同，被认为是引起DN蛋白尿和肾小球硬化的关键因素，这为DN的预防和治疗带来了新的契机。足细胞又称为脏层肾小球上皮细胞，与内皮细胞、肾小球基底膜(glomerularbasementmembrane，GBM)共同构成肾小球滤过屏障。早期损伤形态学表现为足突融合和消失，并逐渐出现足细胞体积变小、阴电荷减少，直至足细胞从GBM上脱落随尿液排出。足细胞是高度分化的细胞，增生能力差，当从GBM上脱落的速度超过了其代偿能力时，破坏了滤过膜的完整性，从而形成大量

3、蛋白尿。同时足细胞不断受到刺激，分泌细胞外基质如Ⅳ型胶原(collogenIV，Col1V)增多，最终引起肾小球硬化。高糖、血管紧张素II、脂质代谢紊乱、氧化应激、炎症因子等均可刺激足细胞，引起足细胞功能失调，导致足细胞损伤。新近研究表明足细胞的功能异常与本身表达的特异性结构蛋白发生突变或缺失有关。有关足细胞结构蛋白研究较多的是裂孔膜蛋白，它们组成裂孔膜复合体共同维持着裂孔膜的完整性。近年来足盂蛋白(podocalyxin，PCX)在多种肾脏疾病足细胞损伤中的作用受到重视，它是足突项膜区的成熟标志，是足细胞上主要带电荷的结构蛋白，也是组成。肾小球滤过膜电荷屏障的主要物质之

4、一，当肾组织表达减少或尿中表达增多可提示早期足细胞损伤。．结蛋白(desmin)是～种细胞骨架中间丝蛋白，与0【．平滑肌肌动蛋白(0【．smoothmuscleactin，仅．SMA)一样属于肌源性细胞标志，正常情况下仅在系膜细胞少量表达，足细胞不表达，当足细胞受损发生表型改变时，可大量表达，中文摘要因此也可作为反映足细胞损伤的标志。磷酸酰肌醇3激酶／蛋白激酶B(phosphoinositide3kinese／proteinkinaseB，P13K／Akt)信号通路参与细胞分化、增殖、凋亡以及迁徙等，其过度激活导致细胞功能失调。LY294002通过靶向抑,OPl3K的催化

5、亚基p110，阻碍P13K的活化，从而抑制其下游靶分子PDK和Al(t的活化，．成为研究P13K-Akt通路最经典的抑制剂。第10号染色体同源丢失性磷酸酶．张力蛋白基因(phosphaseandtensinhomologydeletedonchromosometen．PTEN)，具有特异磷酸酯酶的活性，是P13K／Akt通路的负调控基因，通过使在3’羧基位脱磷酸生成PIP2，拮抗P13K的作用，实现对P13K／Akt通路的负调控。研究表明，P13K／Akt通路参与了DN小管上皮细胞转分化、系膜细胞增生肥大等，我科最新的研究也证实了该通路参与了高糖刺激的肾小管上皮细胞脂质代

6、谢和细胞外基质的产生，然而该通路在糖尿病肾病足细胞损伤方面的研究却鲜见报道，尤其未见DN患者方面的相关报道。本研究拟通过观察DN患者及体外高糖刺激的小鼠足细胞中P13K／Akt通路的激活和足细胞结构蛋白的表达变化，并进一步应用LY294002干预或PTEN基因转染足细胞，探讨P13K／Al(t通路对足细胞结构蛋白表达改变的影响，以证明P13K／Akt通路在DN足细胞损伤中是否发挥作用，为糖尿病肾病的防治提供新的干预靶点。方法：1糖尿病。肾病患者病例选择及PCX、ColIV、desmin、p-Akt、PTEN的检测选择2009年10月至2011年10月期间在河北医科大学第二

7、医院肾内科住院，经病史、临床检查及肾活检病理诊断为糖尿病肾病的患者30例，年龄51．5+15．7岁，男16例，女14例(男：女=8：7)，除外乙肝病毒相关性肾炎、狼疮性肾炎、紫癜性肾炎、淀粉样变性、骨髓瘤肾病等继发性肾脏病患者，除外合并膜性肾病、局灶阶段性肾小球硬化、IgA肾病等原发性肾脏病的患者。根据根据2010年美国肾脏病理学会糖尿病肾病分级标准将所有患者分为3组：I级病变组9例，II级病变组10例，III级病变组11例。详细记录每位患者肾活检前的临床资料。肾活检日清晨留取新鲜尿标本，离心取上清液，ELISA方法检测尿PC