nalp3-sirna对缺氧复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制

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1、分类号：密级：单位代码：10114学．号：200910089NALP3一siRNA对缺氧／复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制研究指导教师：奎苤出麴援申请学位门类级别：医堂亟±专业名称：内型堂研究方向：竖功能丕全的基础量!崮压所在学院：笠三!崮压医堂瞳2012年05月15同学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工

2、作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：!：呈受鱼同期：堡!兰年』二月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科

3、大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：兰曼幽艚聱婴淼抵所(本声明的辰鬏鸹笛磊医科人!学所日期：翌!三年上月丛二日FI期：——年——月——日有，朱经许可，任何单位及任何个人不得擅自使川)目录中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．I英文摘要⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯II、III缩略词表．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．Ⅳ正文．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1日U吾．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．上材料与方法．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．⋯．⋯．．．．．．．．．．

5、．．3结果．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17乡日7K·⋯···········································I讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24参考文献⋯⋯．⋯⋯．．⋯．．．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．25综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

6、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27参考文献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32个人简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35致谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36山西医科大学硕士学位论文NALP3一siRNh对缺氧／复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制摘要目的观察缺氧／复氧对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK．52E)

7、的损伤以及对胞内模式识别受体NALP3蛋白表达的影响。并通过构建NALP3．siRNA抑制大鼠’肾小管上皮细胞NALP3的表达，探讨其对缺氧／复氧诱导细胞凋亡的保护作用及其机制。方法(1)利用三气培养箱调整氮气压力条件形成缺氧条件，缺氧1h，分别复氧lh、2h、4h、8h、16、24h后收集细胞和培养上清液。胎盘蓝摄取法进行活细胞计数，并检测培养上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)含量以及细胞NALP3蛋白的表达。(2)根据大鼠NALP3全长基因序列设计并合成NALP3．si．RNA质粒，转染大鼠肾小管上皮细胞(NRK．52E)，

8、以无关siRNA转染组作为对照。用Western印迹法检测转染细胞NALP3蛋白的表达。(3)将细胞分为正常对照组、H／R组、无关siRNA转染组和NALP3．siRNA转染组。利用三气培养箱调整氮气压力形成缺氧条件，缺氧1h复氧4h后检测培养液上清LDH的含量和细胞NALP3蛋白的表达。