骨化三醇对缺氧肾小管上皮细胞的保护作用及其抗肾纤维化机制的研究

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3、_=‰一～：一毫。，一～河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：荫处导师签章：毋J、三妥≯o／争年岁月≯≤日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7研究论文骨化三醇对缺氧肾小管上皮细胞的保护作用及其抗肾纤维化机制的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．99日Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41综述维生素D与慢性肾脏疾病的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55中文摘要骨化三醇对缺氧肾小管上皮细胞的保护作用及其抗肾纤维化机制的研究摘要目的：通过观察骨化三醇对缺氧诱导的肾小管上皮细胞(Humankedneyproxiamaltubularcells．2，HK-2)的影响，探讨骨化三醇对肾小管上皮细胞的保护作用及其通过肾小管上皮细胞途径改善肾纤维化的可能机制。方法：1人肾小管上皮细胞的培养：人肾小管上皮细胞株(HK一2)，在37℃、5％C02、饱和湿度下用含10％胎牛血清的DMEM／F121：l培养基培养。将HK．2细胞分为5组：①空白对照组；②

6、氯化钴刺激组；③氯化钴+10。omol／L骨化三醇高剂量组；④氯化钴+10。11mol／L骨化三醇中剂量组；⑤氯化钴+10。2mol／L骨化三醇低剂量组。2采用MTT法观察骨化三醇对氯化钴刺激人肾小管上皮细胞增殖能力的影响。3采用AnnexinV／PI双染法流式细胞术分析骨化三醇对各实验组人肾小管上皮细胞凋亡率的影响。4采用酶联免疫吸附实验(enzyme．1inkedimmnosorbentassay，ELISA)检测各组细胞培养上清液中VEGF、MCP一1、TGF—p的含量。5采用逆转录聚合酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，R

7、T．PCR)检测各组细胞VEGF、MCP．1、ICAM．1mRNA的表达水平。6采用免疫印迹(WesternBlot)法检测各组ICAM．1蛋白的表达水平。结果：1骨化三醇对经氯化钴诱导的HK一2细胞增殖的影响低氧可明显抑制HK-2细胞增殖，细胞培养液中骨化三醇的终浓度为10。11mol／L时，HK．2细胞增殖最明显，与氯化钴刺激组相比，差异有统计学意义(P

8、有统计学意义俨