mtdh在脂多糖促进乳腺癌迁移侵袭中作用的研究

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1、山东大学硕士学位论文MTDH在脂多糖促进乳腺癌迁移侵袭中作用的研究姓名：赵逾涵申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：杨其峰2012-10-10山东大学硕士学位论文MTDH在脂多糖促进乳腺癌迁移侵袭中作用的研究研究生：赵逾涵导师：杨其峰中文摘要研究目的：乳腺癌是全世界范围内女性最常见的恶性肿瘤之一，而其发生浸润转移是预后较差的主要原因。炎症刺激在乳腺癌的浸润转移过程中起到重要的作用，临床研究发现乳腺实体肿瘤中存在炎症细胞的浸润，但目前对该现象及机制尚未明确。我们前期研究发现Metadherin(MTDH)在乳腺癌的浸润转移中发挥

2、着极其重要的作用，本实验拟通过脂多糖模拟炎症微环境，诱导乳腺癌细胞发生相应反应，研究MTDH在炎症反应过程中对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响，并初步探讨其具体的分子生物学机制。研究方法：通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RealtimePCR)及免疫蛋白印迹法(Westernblot)检测乳腺癌细胞系中LPS刺激后MTDH和Toll样受体4(TLR4)等mRNA及蛋白表达水平的变化。通过用shRNA的方法选取干扰序列，构建干扰载体，用脂质体2000的方法转染乳腺癌细胞系MDA-MB一231，沉默MTDH基因的表达，稳定筛选MTDH低

3、表达的MDA—MB一231细胞系。通过细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验等方法检测MTDH基因沉默后，在脂多糖诱导的炎症反应中细胞迁移侵袭能力的改变。通过文献检索和RealtimePCR和Westernblot等方法筛选迁移侵袭的相关分子通路，初步阐明bITDH在炎症介导乳腺癌迁移侵袭过程中的分子生物学机制。结果：在TLR4阳性的乳腺癌细胞系MDA—MB一231，MDA—MB一468，MCF一7中，LPS的刺激后，MTDH的mRNA及蛋白表达水平均明显上调。通过研究MTDH沉默的乳腺癌细胞系MDA—MB一231，细胞划

4、痕实验和Transwell实验结果显示：在无LPS刺激时，MTDH沉默的MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力较对照组明显下降；在加入LPS刺激时，MTDH沉默的MDA—MB一231细胞迁移侵袭能力无明显改变，但对照组细胞迁移侵袭能力明显增强。以上结果说明MTDH在LPS介导的乳腺癌迁移侵袭中发挥着重要的作用。然而在TLR4阴性的细胞系T47D中，LPS的刺激后MTDH的表达量和细胞的迁移侵袭能力均无变化。以上结果显示MTDH在脂多糖介导乳腺癌迁移侵袭能力的改变是通过山东大学硕士学位论文TLR4信号传导通路的作用。通过对信号传导通

5、路筛选进一步的分析，我们发现MTDH基因的沉默可以抑制LPS诱导的NF—kappaB通路的激活，并可以抑制LPS诱导的IL一8、MMP一9的分泌。这提示在炎症促进乳腺癌的迁移侵袭中，MTDH可通过炎症诱导的NF—kappaB通路影响乳腺癌的迁移侵袭能力的改变。结论及意义：MTDH在LPS诱导乳腺癌细胞迁移侵袭的过程中都起到重要的调节作用，沉默MTDH可通过TLR4信号传导通路抑制NF—kappaB通路的激活和IL一8、MMP一9的产生，进而抑制乳腺癌细胞的迁移侵袭能力。综上所述，我们的研究结果显示MTDH在炎症促进肿瘤进展的过程

6、发挥着重要的作用，这为MTDH作为乳腺癌治疗的靶点提供了新的理论依据。关键词：MTDH；脂多糖；TLR4受体；乳腺癌；迁移侵袭。山东大学硕士学位论文MetadherinMediatesLipopolysaccharide—inducedMigrationandInvasionofBreastCancerCelIsAbstractObjective：Breastcanceristhemostprevalentcancerinwomenworldwideandmetastaticbreastcancerhasverypoorprog

7、nosis．Inflammationhasbeenimplicatedinmigrationandmetastasisofbreastcancer，althoughtheexactmolecularmechanismremainselusive．ThisstudyaimedtoobservethechangesintheexpressionlevelsofMTDHandthefollowingphenotypescausedbyinductionofapro—inflammatoryendotoxin．Methods：Diffe

8、rencesintheexpressionlevelsofMTDHandTLR4，bothmRNAandproteinlevels，weredetectedbyRealtimePCRandWesternblotassay．Efficientknockdownof