脂多糖促进小鼠抗结核免疫功能的研究

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1、分类号R392.密级学校代码10367UDC577.109编号学号20125231007脂多糖促进小鼠抗结核免疫功能的研究Lipopolysaccharidepromoteanti-tuberculosisimmunityinmousemodel论文类别：学术研究型作者姓名张爱霞指导教师姓名钱中清教授申请学位级别硕士学位授予单位蚌埠医学院学科专业免疫学研究方向细胞免疫论文答辩时间2015年5月学位授予日期2015年6月答辩委员会主席：王健教授论文评阅人：2015年5月硕士学位论文脂多糖促进小鼠抗结核免疫功能的研究论文题目：Lipopolysaccharidepromo

2、teanti-tuberculosisimmunityinmousemodel研究生姓名:张爱霞指导教师:钱中清教授学科专业:免疫学研究方向:细胞免疫论文工作时间:2013年3月至2015年3月学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和。本论义中除引文外，所有实验。取得的研究成果、数据和有关材料均是真实的本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献巧已在论文中作了声明并表示了谢意。：学位论文作者签名：杂襄円期＞仪霍＾学位论义使用授权声明

3、研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属辟璋医学院。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可借阅或上网公布本学位论文的部分或全、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可向国家有部内容，可政采用影印关机关或机构送交论文的电子和纸质文档。（保密论文，允许论文被查阅和借阅在解密后遵守此规定）保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：保密斯限为年。学位论文作者签名：森焉裝导师签名：：．円期：円期如知沪ｇＨＳ．心１目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………

4、…………………………41前言……………………………………………………………………………72材料与方法……………………………………………………………………103结果……………………………………………………………………………184讨论……………………………………………………………………385结论…………………………………………………………………………40参考文献……………………………………………………………………41致谢…………………………………………………………………………45附录附录A英中文术语缩略语对照表……………………………………46附录B常用试剂配制………………

5、………………………………48附录C个人简历及发表论文…………………………………………50附录D综述……………………………………………………………51脂多糖促进小鼠抗结核免疫功能的研究中文摘要研究背景：结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，M.tb）是引起结核病发病的病原菌。已有研究表明[1]，机体感染M.tb后，M.tb可隐藏于宿主巨噬细胞内，通过抑制巨噬细胞抗M.tb自噬，逃逸免疫杀伤，造成潜伏感染。现已有多种研究证明，清除胞内菌感染主要依靠于固有免疫和诱导保护性细胞免疫。一般认为巨噬细胞和淋巴细胞在抗结核感染免疫中起重要作用。本实验室前

6、期从细胞水平研究发现：LPS能通过上调TLR4的表达水平，以及ROS产量上升从而促进巨噬细胞对M.tb的氧依赖性的杀伤，IFN-γ可以促进巨噬细胞对病原体的自噬。因此本研究从动物模型水平进一步研究非M.tb来源的TLR4受体激动剂LPS对小鼠单核-巨噬细胞抗结核杆菌免疫功能的调控作用。目的：研究LPS对感染结核杆菌小鼠单核-巨噬细胞抗结核杆菌免疫功能的调控作用。方法：1.取M.tb（H37Ra）在苏通氏液体培养基中，培养箱培养1个月后转种于7H11固体培养基中，37°C恒温培养箱内培养1个月，使用无菌接种环收取M.tb菌种于1ml匀浆器中，加入Tween-80反复研磨

7、，取细菌悬液，用Tween-80经10000rpm×2min洗涤3次，抗酸染色阳性且镜下观察细菌分散。使用分光光度仪检测菌液浓度，并用生理盐水稀释成浓度为2×108CFU/mL的M.tb悬液，放入4°C冰箱备用。2.调整M.tb减毒株H37Ra活菌量的浓度为（2×108CFU/ml)尾静脉打入C57BL/6小鼠体内，分别于7天、14天、21天处死小鼠，取肺、脾组织做病理切片和研磨培养，同时称取肺脾重量，检测脏器重量指数，确定M.tb是否成功感染小鼠。3.根据LPS试剂说明LPS致小鼠发热剂量为500ng/kg，故将LPS剂量设为250ng/kg、50