microrna--455--3p在胃癌中表达的临床病理意义及其作用机制研究

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1、温州医学院博士学位论文MicroRNA--455--3p在胃癌中表达的临床病理意义及其作用机制研究姓名：张琦申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：叶再元2012-05温州医学院博士学位论文MicroRNA一455．3p在胃癌中表达的临床病理意义及其作用机制研究中文摘要研究背景：胃癌是消化道最多发的肿瘤，深入研究胃癌细胞侵袭转移的分子机制，找寻作为胃癌早期诊断和预后判断的标记物，将会在临床上对胃癌的预防、治疗和预后产生深远影响。mieroRNA分子是近年来分子生物学和遗传学领域的研究热点，它通过诱导靶m

2、RNA降解或阻遏其转录后翻译而起到致癌或抗癌作用。miRNA在肿瘤组织中差异表达，不同肿瘤的miRNA表达谱存在显著的差异，体现了其与人类肿瘤发生、发展的密切关系，充分表现了miRNA参与基因调控的复杂性，其调控的靶基因参与了肿瘤的分化、增殖、侵袭等过程。因此以miRNA作为新的切入点，研究胃癌形成、发展、浸润和转移过程中的作用及机制，为胃癌早期诊断、预后评估和靶向药物治疗等开辟了新的途径。目的：检测miR-455．3p在人胃癌细胞系SGC．7901，人正常胃上皮细胞GES．1及人胃癌组织中的表达，探讨

3、miR-455．3p对人胃癌细胞SGC．7901增殖、侵袭和迁移的影响以及对TMEFFl蛋白表达的调控，以及miR-455．3p在胃癌组织中的表达与胃癌患者预后的相关性。方法：应用基因芯片技术筛选出差异表达的miRNA，并从中选择miR．455．3p作为研究对象。应用TRIZOL试剂提取人胃癌细胞系SGC．7901、人正常胃上皮细胞GES．1及44例人胃癌组织及其配对的癌旁非肿瘤胃粘膜组织的miRNA，按miScriptReverseTranscriptionledt合成eDNA，miR．455．3p和

4、U6引物购自QIAGEN公司，用／vIX3000P型荧光定量PCR仪进行实时定量RT-PCR。将5．0x103个细胞／孔接种于6孔培养板并混匀，37℃、5％C02孵育箱静置培养24小时。按Lipofectamine2000说明书将miR．455．3p抑制物和NegativeControl转入SGC．7901细胞，转染24小时后荧光显微镜检测转染效率、RT-PCR检测miR．455．3p的表达水平，并观察转染后细胞增殖、侵袭和迁移能力。按照原位杂交检测试剂盒说明书进行原位杂交实验，检测miR-455．3p

5、在436例人胃癌组织标本的表达水平。结果：与癌旁非肿瘤胃粘膜相比，胃癌组织表达上调大于或等于2．0倍的温州医学院博士学位论文miRNA有49个，其中miR．455．3p在胃癌组织表达上调4．9倍。miR．455．3p在人胃癌细胞株SGC．7901的表达量显著高于人正常胃上皮细胞GES．1的表达量，miR．455．3p在77．2％(34／44)的胃癌组织中高表达。胃癌细胞株SGC．7901中miR-455．3p的表达水平较正常胃粘膜细胞株GES．1中明显升高。下调miR-455．3p表达对胃癌细胞SGC．

6、7901的增殖、迁移及侵袭能力具有显著抑制作用。原位杂交结果表明miR．455．3p在癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达，而在39．0％(170／436)的胃癌组织中高表达，miR-455．3p的表达与肿瘤大小、肿瘤位置、Lauren分型、浸润深度、淋巴结转移、淋巴结转移分期、远处转移及TNM分期有关。I、II和III期，miR-455．3p低表达胃癌患者5年生存率显著高于高表达胃癌患者，miR-455．3p表达与IV期患者5年生存率无关。独立预后因素分析表明miR．455．3p表达是胃癌的独立预后因素之一

7、。通过预测软件，我们发现TMEFFl可能是miR．455．3p的靶基因。在SGC．7901胃癌细胞中，miR．455．3p表达增高能促进TMEFFlmRNA降解，从而导致胃癌细胞中TMEFFlmRNA水平降低；而抑制胃癌细胞中miR．455．3p的表达能使TMEFFl的mRNA表达增高，由此证实TMEFFl基因可能是miR．455．3p调控的靶基因之一。结论：1．与癌旁非肿瘤胃粘膜相比，胃癌组织表达上调大于或等于2．0倍的miRNA有49个，其中miR．455．3p在胃癌组织表达上调4．9倍。miR．4

8、55．3p在人胃癌细胞株SGC．7901高表达，其表达量显著高于人正常胃上皮细胞GES．1的表达量，miR-455．3p在77．2％(34／44)的胃癌组织中高表达。2．胃癌细胞株SGC．7901中miR．455．3p的表达水平较正常胃粘膜细胞株GES．1中明显升高。下调miR．455．3p表达对胃癌细胞SGC．7901的增殖、迁移及侵袭能力具有显著抑制作用。3．miR-455．3p在39．0％(170／436)ff勺胃癌组织中高表达，其表