TMEM41A在胃癌中表达的临床意义及其在胃癌转移中的机制探讨.pdf

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1、分类号：R735.2密级：公开学校代码：11065学号：y0113130032专业博士学位论文TMEM41A在胃癌中表达的临床意义及其在胃癌转移中的机制探讨作者姓名林彬指导教师毛伟征（教授）专业领域外科学（普外科）培养单位医学部临床医学系答辩日期2018年5月19日TMEM41A在胃癌中表达的临床意义及其在胃癌转移中的机制探讨摘要目的：跨膜（Transmembrane,TMEM）蛋白家族存在于真核细胞膜上，参与信号传导途径和肿瘤的发生发展。这些蛋白质在膀胱癌、卵巢癌和结直肠癌中起关键作用。TMEM家族具有300多个蛋白，这些蛋白既在细胞的生理功能过程发生作用，如

2、构成细胞膜的离子通道、活化信号传导通路、影响细胞趋化、粘附、调亡等，也在病理过程中参与细胞间或细胞内的信号传导、肿瘤的发生发展、免疫相关疾病等。TMEM41A是TMEM家族的成员之一，是由人类3号染色体上基因编码的264个氨基酸蛋白。人3号染色体存在近21万碱基对，编码1000多个基因。人3号染色体上存在一系列的癌症相关位点，并且编码一系列趋化因子基因簇。其一些特殊位点在一些肿瘤细胞中缺失。胃癌在全球范围内，特别是我国，是发病率最高、最常见的消化系统来源的恶性肿瘤之一。转移复发是恶性肿瘤患者死亡的最主要原因之一。肿瘤转移是指原发部位的恶性肿瘤细胞脱离原发肿瘤的生

3、长部位通过血液、淋巴等不同的转移方式，到达机体内的相同或不同继发组织或器官，在这些部位得以继续生长，形成与原发肿瘤相同生物学特性的继发肿瘤的全过程。这整个过程包括多个阶段、过程，其中肿瘤细胞具有侵袭特性是肿瘤转移的前提，侵袭能力越强，转移的特性越强。但是TMEM41A在胃癌中的确切作用至今尚未确定。本实验的目的是探讨TMEM41A在胃癌中表达的临床意义,以及其在胃癌转移中的机制。方法：1.TMEM41A在胃癌组织中的表达和胃癌根治性切除患者预后的相关性分析应用Real-TimePCR和免疫组织化学的方法对病人的临床病理组织进行分析，手术标本来源于患者手术中切除的

4、临床病理组织标本，术前经胃镜病理诊断为胃癌，术后均经病理学检测诊断为胃癌，位置包括胃底、胃体、胃窦及贲门、幽门等位置。所有患者的临床病理学资料完整，包括年龄、性别、分化程度、肿瘤位置、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、TNM分期等。纳入研究中的胃癌患者施行肿瘤切除手术前均未曾接受放、化疗等抗肿瘤临床治疗。通过医院病理科收集上述患者组织蜡块，排除临床及病历资料不完整及失访病例，将纳入临床分析的实际病例的组织切片进行固定染色，确定组织学分级及病理学类型等，评估TMEM41A在胃癌中的表达和定位及其与预后的关系。首先采用qRT-PCR法检测胃癌组织和癌旁正常组织的TME

5、M41A的mRNA表达水平。我们将病人的胃癌组织根据的病理结果有无淋巴结转移进行分组，分为淋巴结转移阳性组和淋巴结转移阴性组，将两组的mRNA水平I进行对比分析，检测TMEM41AmRNA表达水平与淋巴结转移的关系。我们又将病人的胃癌组织根据手术时的病理结果按有无远处转移进行分组，分为远处转移阳性和远处转移阴性组，将两组的mRNA水平进行对比分析，检测TMEM41AmRNA表达水平与远处转移的关系。除此之外，我们又将病人的胃癌组织根据手术时的TNM分期进行分组，分为TNMI、II、III、IV期。将4组的TMEM41AmRNA水平进行对比分析，检测TMEM41A

6、mRNA表达水平与TNM分期的关系。我们利用免疫组织化学染色，对患者的胃癌及癌旁组织标本中TMEM41A进行定位，根据表达强度将标本分为表达阳性组和表达阴性组。为了研究TMEM41A的表达和胃癌的临床病理特征的关系，我们将所有临床病理学资料完整的病人，按年龄、性别、分化程度、肿瘤位置、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、TNM分期等根据其表达高低进行分组，分析比较TMEM41A在各组间的表达差异,研究TMEM41A的表达与患者预后的相关性。将患者按照TEME41A的高低表达分组，分别统计随访时间内的死亡率以及无病生存率，分析比较TEME41A的高低表达与死亡率和无病

7、生存率的关系。分别统计随访时间内1年生存率，3年生存率及5年生存率，分析比较TEME41A的高低表达与它们的关系，并以此为依据绘制生存曲线2.TMEM41A表达对胃癌细胞侵袭转移的影响我们检测了TMEM41A在不同胃癌细胞株中的表达情况。TMEM41A过表达实验选用目标基因表达量较低的细胞系，TMEM41A干扰敲低实验选用目标基因表达量最高的细胞系。在目标基因表达量高的细胞系中，通过WesternBlot检测，验证通过转染si-TMEM41A，是否可以下调TMEM41A蛋白表达量；在目标基因表达量低的细胞中，验证通过转染过表达质粒pCMV6-TMEM41A，是否

8、可以使TMEM41A表达