mir-199a-5p在胃癌中表达的临床病理意义及作用机制的研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：!h殳g!i旦至垒Q卫垒主hQ!Qg主Q垦羔§ig坠重至i堡垒旦Q皇Q至里至基二!皇旦垒二墨坠星丕卫!皇苎曼iQn至n鱼垒墨主兰至鱼Q垒兰垒inQ堡垒垒卫亟主h金inY金曼主ig垒主iQ卫至Q兰丛Q!金Q坠1鱼!丛金鱼h垦旦i墨卫曼Q至堡i基二l鱼鱼垒二亘卫答辩委员会主席：答辩委员会成员：万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要(关键词)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要(关键词)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前雷⋯⋯⋯⋯．'

2、⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：6第一部分miR-199a一5p在胃癌组织及人胃癌细胞中的表达情况8(一)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8(二)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13第二部分miR一199a-5p对胃癌细胞迁移及侵袭作用的研究⋯⋯15(一)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15(二)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19第三部分miR-199a一5p靶基因的预测与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(一

3、)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23(二)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第四部分miR．199a一5p及其靶基因klotho在胃癌组织中的表达及与临床病理指标的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29(一)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29(二)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47参考文献

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51万方数据综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60lIIIIIIIIIIIIIllIItllllIIIY2691667万方数据温州医科大学硕士学位论文miR-199a-5p在胃癌中表达的临床病理意义及其作用机制的研究中文摘要研究背景：胃癌是世界上最常见的

5、恶性肿瘤之一，7其发病率及死亡率均较高。目前对进展期和胃癌术后复发患者的治疗效果不佳，其中的原因之一是我们对其发生的分子机制认识不够全面，而寻找可以广泛用于临床的、高效的、特异的分子标记物，用于胃癌早期诊断及预后判断，将成为胃癌研究分子生物学领域的重要方向。最近的研究发现，miRNAs是基因表达的负性调控因子，miRNAs具有癌基因或者抑癌基因的活性，通过对靶基因的调控，从而参与调节细胞的生长、周期及迁移等过程；同时，miRNAs在组织、血清及其他一些体液中还具有较好的稳定性。因此，miRNAs有成

6、为肿瘤生物标记的广阔前景，对于胃癌的早期诊断及治疗有深远的临床意义。目的：检测miR-199a-5p在人胃癌细胞株(MKN．45、MKN．28、SGC一7901、BGC．823、HGC．27、AGS)、人正常胃黏膜上皮细胞株GES．1及人胃癌组织中的表达，探讨miR-199a-5p对人胃癌细胞MKN．45、MKN．28及AGS、BGC．823侵袭和迁移的影响，miR-199a-5p对klotho蛋白表达的调控。方法：按照TR／zol试剂盒说明书的步骤提取34例新鲜胃癌组织及其配对的癌旁正常胃黏膜组织

7、的总RNA，同样提取人胃癌细胞株(MKN．45、MKN．28、SGC．7901、BGC．823、HGC．27、AGS)及人正常胃黏膜上皮细胞株GES．1的总RNA，使用SuperscriptIIIeDNAsynthesiskit试剂盒合成cDNA，应用实时定量RT-PCR方法检测miR-199a-5p的表达水平。以6孔培养板行细胞铺板，每孔接种5．Oxl05个细胞，在37℃、5％C02培养箱静置培养24小时。按Lipofectamine2000说明书将miR-199a．5pinhibitor及阴性对

8、照inhibitornegativecontrol转染入MKN．45、MKN．28，将miR-199a．5pmimic及阴性对照mimicnegativecontrol转染入AGS、BGC．823；转染24后后，行transwell实验，观察细胞迁移、侵袭能力。荧光素酶报告基因检测系统验证miR-199a-5p的靶基因。按照原位杂交检测试剂盒及免疫组织化学通用型SP系列工作液试剂盒说明书的步骤进行操作，分别检测miR-199w5p及ldotho蛋白在103例石蜡固定的