grb2抑制对肠癌细胞ht29肿瘤相关信号转导的影响

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1、分类号：R392学校代码：10392学科专业代码：100102学号：200603081福建医科大学硕士学位论文Grb2抑制对肠癌细胞HT29肿瘤相关信号转导的影响Grb2inhibitionofcoloncancercellsHT29tumor-associatedsignaltransduction学位类型：医学硕士所在学院：基础医学院申请人：陈丽妹学科、专业：免疫学导师：叶韵斌教授研究起止日期：2010年03月至2012年05月答辩日期：2012年05月29日二○一二年六月0万方数据1万方数据目录英文缩略词表…………………………………………………………………………………1中文摘要……

2、…………………………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………………………………3前言………………………………………………………………………………………………5材料与方法………………………………………………………………………………………7结果………………………………………………………………………………………………23讨论………………………………………………………………………………………………27结论………………………………………………………………………………………………31参考文献…………………………………………………………………

3、……………………·32致谢………………………………………………………………………………………………35综述………………………………………………………………………………………………362万方数据英文缩略词表（Abbreviation）英文缩写英文全称中文全称CRCcolorectalcancer结直肠癌thegrowthfactorreceptor-boundGrb2protein-2生长因子受体结合蛋白-2MAPKmitogen-activatedproteinkinases促分裂素原活化蛋白激酶CMLchronicmyelognousleukemia慢性粒细胞性白血病RNAiRNAin

4、terferenceRNA干扰shRNAshorthairpinRNA发夹RNAsiRNAsmallinterferingRNA小干扰RNAERKextracellulersignal-regulated细胞外信号调节激酶kinaseP-ERKphosphorylationofERK磷酸化的细胞外信号调节激酶AKTproteinkinaseB丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶BP-AKTphosphorylationofAKT磷酸化的蛋白激酶BdsRNADouble-strandRNA双链RNAPTGSpost-transcriptionalgenescilencing转录后水平基因沉默HIVHum

5、animmunodeficiencyvirus人免疫缺陷病毒puroRPuromycinresistancegenefor嘌呤霉素选择基因mammalianselectionODopticaldensity光密度TGSTranscriptionalGeneSilencing转录水平基因沉默1万方数据Grb2抑制对肠癌细胞HT29肿瘤相关信号转导的影响摘要[目的]分析Grb2shRNA转染对肠癌细胞HT29信号通路的影响，探讨针对Grb2的抑制应用于肠癌治疗的可行性。[方法]应用shRNA慢病毒质粒系统，将Grb2shRNA转染至293T细胞，获得Grb2shRNA慢病毒颗粒，并感染肠癌H

6、T29细胞。MTT法检测细胞生长抑制情况，利用RT-PCR检测Grb2mRNA表达，WesternBlot检测Grb2、P42/44ERK、磷酸化P42/44ERK、Akt、磷酸化Akt（P-Akt）和STAT5等信号通路分子表达的改变。[结果]Grb2shRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞后，获得5株感染shRNA慢病毒颗粒的肠癌HT29细胞株为实验组（即感染Grb2shRNA的细胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73），以eGFPshRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞为阴性对照

7、组。感染72小时后，经RT-PCR、WesternBlot检测后，发现HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞中Grb2的抑制效果最好。与空白对照、阴性对照比较，HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞在感染后24小时OD值分别为0.176±0.045，0.186±0.013（P<0.001）,48小时为0.347±0.048、0.382±0.041(P<0.001),72小时为0.934