血清抑制相关基因Si1对肿瘤细胞自噬的影响

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1、扉页：独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：鸯缢圣日论文使用和授权说明期：銎V!，!÷÷本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手

2、段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名：j圣生导师签名：氅日期：!里!’：!：!警本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：～导师签名：：日期：云南大学硕士学位论文摘要血清是细胞生长所必需的，它含有细胞生长的必需成分。血清缺少时，细胞将被停滞在GO期。血清抑制基因(Si．1)基因是本实验室发现，

3、研究并命名的一种在细胞血清饥饿时表达的基因。目前对该基因的研究甚少，该基因的具体功能也尚未见报道。该基因全长5429bp，含有791个氨基酸残基。自噬，是一种有别于细胞程序性死亡(细胞凋亡)的另一种细胞死亡方式，又称为II型细胞程序性死亡。在哺乳动物中，它是细胞内蛋白和某些细胞器降解的途径，对维持细胞内平衡、细胞生存、增殖和生长是必要的。肿瘤细胞有无限增殖的能力，而自噬与肿瘤发生的关系研究得不是很清楚，有研究认为自噬的发生有助于肿瘤的生长；然而部分研究也发现，自噬可以抑制肿瘤的生长，自噬过程可以吞噬

4、掉癌变或者恶化的细胞从而肿瘤生长。至今为止，自噬对肿瘤是把双刃剑。研究清楚自噬在什么情况时对肿瘤是抑制的，对研究治疗肿瘤是很有意义的。本研究成功构建了Si．1基因的真核表达载体Si．1／EGFP-N3和Si．1的RNAi表达载体Si．1／pSilencer，并转染4株肿瘤细胞(Hela、MCF．7、HepG2、U251)。用蛋白印迹、荧光定量PCR方法检测了自噬标记基因LC3、Beclinl的RNA和蛋白水平的变化，以及凋亡标记基因caspase．3的蛋白表达情况，并运用一些细胞染色试剂辅助检测了自

5、噬和凋亡的情况。实验结果发现，当Si．1基因在Hela和MCF．7细胞中过表达时，细胞的生长明显受到抑制，自噬小体数量明显增多，并且自噬标记基因LC3和Beclinl蛋白表达水平也升高，但是与凋亡相关的蛋白Caspase．3没有变化；当在Hela细胞中抑制Si．1基因表达时，自噬发生水平明显降低，自噬标记基因LC3和Beclinl蛋白表达量下降，但对凋亡也没有影响。上述研究显示，Si．1是一个抑制细胞生长的因子，它能通过诱导肿瘤细胞Hela和MCF．7发生自噬，而不是凋亡，从而抑制细胞生长促进肿瘤死

6、亡；而在HepG2、U251两个细胞中自噬和凋亡都不受si．1基因影响。本研究为进一步深入探讨Si．1基因的功能，揭示自噬在不同肿瘤细胞中的所起到的不同作用提供了基础。关键词：Si一1；LC3；白噬；凋亡；肿瘤增殖AbstractSerumis趾essentialelementforcellsurvival，itcontainessentialfactortocell．CellwillberestrictedatGOphasewithoutserum．Si-1genehavebeenfoundand

7、namedbyourlab．However,theresearchofthisgeneisstillless，thefunctionofSi-1genehadnotbeenreportedanditstillneedmoreresearchthanbefore．Si·1genehas5429bpand791aminoacidresidues．Autophagyisakindofcelldeathdefferentfromapoptosis，alsonamedIIprogrammedcelldeath

8、．Inmammalian，autophagyisadegradationprocessofproteinsandorganelles，itisrequireforcellularmaintenance，cellviabilitiy,differentiationanddevelopment．Tumorhasanabilityofuncontroledproliferation，SOnowchemotherapyCan’teradicateit．Therelationo