大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖影响及作用机制研究.doc

《大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖影响及作用机制研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖影响及作用机制研究作者：王旭平　赵玲　王容郭锋辛华【摘要】　　目的：探讨大蒜素对体外培养结肠癌HT29细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度大蒜素对HT29细胞增殖抑制率；流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达。结果：MTT显示大蒜素能抑制人结肠癌HT29细胞的增殖，并具有时间-剂量依赖性；流式细胞术测定结果显示10μg/ml大蒜素可明显诱导HT29细胞凋亡，并将细胞周期阻滞在G2/M期；可降低癌基因蛋白Bcl表达，而促进Ba

2、x表达。结论：大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖具有抑制作用，可能与细胞周期阻滞和凋亡相关蛋白表达有关。【关键词】大蒜素　结肠癌细胞系T29　凋亡　流式细胞术【ABSTRACT】Objective:TostudytheaffectionofDiallyltrisulfideonculturedhumancoloncarcinomacelllineHT-29anditsmechanism.Methods:Theviabilityofcellsaftervarioustreatmentsweredeterminedusingthem

3、ethodofMTT.FlowcytometrywereusedtoanalyzethechangeofcellcycleandBcl-2,Baxlevels.Results:TheproliferationofhumancoloncarcinomaHT-29cellswereinhibitedbyDiallyltrisulfide.Theinhibitionwasassociatedwithdoseandtimedependence.Flowcytometryresultsshowedthat:1）Whencellswere

4、treatedwithDiallyltrisulfideattheconcentrationof10μg/mLfor12hand24h,thepercentageofG0/G1phasecellswasdecreasedandthatofG2/Mphasecellswassignificantlyincreasedcomparedwiththoseinthecontrolgroup.2）DiallyltrisulfidedownregulatedBclexpression,whileup-regulatedbaxexpress

5、ion.Conclusions:ItwassuggestedthatDiallyltrisulfideinhibitedHT29cellproliferation.AndthesewereassociatedwitharrestofcellcyclesanddownregulationofBcl2/Baxratio.【KEYWORDS】Diallyltrisulfide·HumancoloncarcinomacelllineHT-29·Apoptosis·Flowcytometry大蒜素是一种从大蒜鳞茎中分离出的具有多种生物学

6、活性的化合物，其化学名为二烯丙基三硫化物。现代医学研究证实大蒜素具有抗菌、消炎、提高机体免疫力和抗肿瘤的作用［1-3］。体外研究显示,大蒜素可以通过诱导癌细胞（如胃癌、前列腺癌）生成活性氧（ROS），上调Bax，Bak和激活Caspase43等方式促进其凋亡［1，4，5］，但大蒜素对结肠癌作用的研究较少。本研究以体外培养的结肠癌HT29细胞为材料，探讨大蒜素对结肠癌细胞增殖的影响并探讨其机制，以期为结肠癌的防治提供实验依据。1　材料与方法1.1　材料　人结肠癌HT29细胞由山东大学医学院细胞生物学研究所提供；大蒜素（二烯丙基代

7、磺酸酯）为上海禾丰制药有限公司生产；MTT、二甲基亚砜（DMSO）、Ho33342、碘化丙啶（PI）为美国Sigma产品；DMEM、新生牛血清为美国Gibco产品；Bcl-2、Bax单克隆抗体购自美国BD公司。1.2　方法1.2.1　细胞培养　人结肠癌HT29细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液，于37℃、5%CO2饱和湿度条件下静置培养。选择对数生长期细胞进行分组实验。1.2.2　MTT法检测大蒜素对细胞增殖的影响　细胞以5×104ml-1的密度接种于96孔培养板中，培养48h后，每孔加入不同浓度的大蒜素各100μl,终浓

8、度分别为1、5、10、20μg/ml，对照组加入含10%FBS的培养基，分别培养12、24、48h后，分别向每孔加入20μlMTT（5mg/ml）溶液，继续培养4h，弃培养液，每孔加入DMSO100μl，脱色摇床振荡5min；酶标仪检测（吸光度为570nm）。每时间浓度组设3