e3连接酶nrdp1调控巨噬细胞功能及其分子机制研究

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1、浙江大学博士学位论文E3连接酶Nrdp1调控巨噬细胞功能及其分子机制研究姓名：叶硕申请学位级别：博士专业：免疫学指导教师：曹雪涛20120526浙江火学博上学位论文摘要E3连接酶Nrdpl调控巨噬细胞功能及其分子机制研究浙江大学医学院：免疫学博士研究生：叶硕导师：曹雪涛院士中文摘要泛素化是由单个或多个泛素在泛素激活酶E1、泛素结合酶E2、及泛素连接酶E3的作用下共价修饰底物蛋白质的过程．研究发现，泛素化不仅可导致底物蛋白质的降解，还可影响底物蛋白质的活性和细胞内定位，是一种调节细胞内蛋白功能和表达水平的重要

2、机制．泛素化修饰可调节细胞的信号转导，分裂和分化等许多过程，同样也在天然免疫以及获得性免疫过程中起重要作用。巨噬细胞是一种重要的免疫细胞，活化的巨噬细胞能分泌大量的酶、细胞因子、NO等活性产物，对于免疫反应的调节和炎症的发展尤为重要。巨噬细胞的活化途径主要有2条，即经典激活途径(cl邪sicalaCtivation，M1)以及替代激活途径(aJtemativeaCtivation，M2)．但泛素化修饰是否参与调控巨噬细胞活化，并没有相关研究．本研究对新型泛素E3连接酶Nrdpl进行了蛋白组学方面的研究。通过

3、DIGE(di腕renceingelelec仃ophoresis)双向电泳-质谱分析，发现在Nrdpl转基因(Nrdpl．TG)小鼠的腹腔巨噬细胞中，表达较高水平的精氨酸酶l(arginaSe1，心91)．Argl是M2型巨噬细胞极化的标志分子，进一步的研究发现，在IL一4活化的Nrdpl．TG小鼠的腹腔巨噬细胞中，M2型巨噬细胞极化相关的其他分子，如Fizzl、Yml及MR也显著上调．Nrdpl干扰lⅢA的实验也得到了一致的结果．此外，Nrdpl可有效抑制LPS活化的腹腔巨噬细胞iNOS和炎性细胞因子V浙

4、江大学博士学位论文摘要(IL一6、TNF．a、IL—lp)的产生，但促进抗炎细胞因子IL．10的分泌。为了进一步研究Nrdpl调控趣l表达的分子机制，免疫共沉淀实验结果发现，Nrdpl能够结合吨基因上游转录因子C／EBPp，但不能结合S卫盯6，并且促进IL一4诱导的C／EBPp泛素化．荧光素酶报告基因实验发现，Nrdpl可促进C／EBPB诱导的他l基因的转录．对Nrdpl．TG小鼠巨噬细胞抗c／EBPp的免疫沉淀产物进行泛素化抗体免疫印迹检测发现，E3连接酶Nrdpl可有效促进c／EBPB的泛素化．因此本研

5、究提示，Nrdpl可通过结合并促进C／EBPB的泛素化活化，上调巨噬细胞中挑l的表达，从而促进巨噬细胞的M2型活化．关键词：E3连接酶；Nrdpl；M2巨噬细胞；精氨酸酶1；iNos；c／EBPDVI浙江大学博士学位论文摘要RegulationofmacrophageactiVationbyE3ligaseNrdplandtheunderlyingmechanismsCollegeofMedicine，ZhejiangUniVersityImmunologyAndidateforPhD：ShuoYeAbst

6、ractSuperVisor：XuetaoCaoAcademicianUbiquitinationis锄er圮ymatic，post一位mslationalmodificationc硎edoutbyasetofthreeenzymes，El，E2andE3．Ubiquitinlabellingdoesnotal、VaysmeandegradationfortlleSubstrateproteins．Itc锄aIsoafrectcellularsub-location觚df．吼ctionoft11esubst

7、rateproteins．Recently’ith笛beensho、ⅣIlthatubiquitinational∞occurrSinbomi肌ate觚dadaptiveimmuIli够MacrophagesarcVerSatilei删[1lunocytesthatplaym孤yroles弱scaVengers，APC(锄tigenpresentingCells)，orsec陀t0Wcellsinbotlli仰ateimm疵t)，auldadaptiVeimmunity．M．acrophageactivat

8、ion，w．hichincludingclaSsicalaCtiVation(M1)锄daltematiVeactiVation(M1)，plays锄impon；明troleinhostdefense．HoweVer'theroleofubiquitinationdudngM1Vers吣M2pol撕zationispoorlyexplored．mt11iswork，aproteomicstudyonNrdpl仃锄