3-氨基苯甲酰胺对高糖培养的牛视网膜血管内皮细胞增殖的影响

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1、目录1.英文缩略表12.中文摘要33.英文摘要54.正文71)前言72)材料和方法93)结果194)讨论275)结论326)参考文献335.附录376.致谢397.综述及参考文献41英文缩略表（abbreviations）英文缩写英文全名中文全名3-AB3-Aminobenzamide3-氨基苯甲酰胺AGEsAdvancedGlycationEndProducts晚期糖基化终末产物AMPampicillin氨苄青霉素APAmmniumpersulphate过硫酸胺BRECBovineretinalcapillaryendothe

2、lialcell牛视网膜血管内皮细胞BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白Caspasecysteineaspartate-specificprotease半胱天冬氨酸蛋白酶DABdiaminobenzidime对氨基联苯胺DEPCdiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMDiabetesMellitus糖尿病DMSOdimethyl-sulphoxide二甲基亚砜DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸DRDiabeticRetinopathy糖尿病视网膜病变ECMEndothe

3、lialcellmedium内皮细胞专用培养基EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸FCMFlowcytometry流式细胞术kDaKilodalton千道尔顿ODOpticaldensity吸光度值PARPPoly(ADP-ribose)polymerase聚腺苷二磷酸核糖聚合酶PBSPhosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液SPSSStatisticalPackageforSocialScience社会科学统计软件包SDS-PAGESodiundodecylsulf

4、atepolyacrylamindgel十二烷基磺酸钠－丙烯酰胺eletrophoresis凝胶电泳1TBSTrisbufferedsalineTris缓冲液TBSTTrisBufferedSalinTween-20Tris缓冲盐水+吐温TEMEDN,N,N’,N’-tetramethylenediamine四甲基乙二胺TNFTumornecrosisfactor肿瘤坏死因子WBWesternBlotting免疫印迹VEGFvascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子23-氨基苯甲酰胺对高糖培养

5、的牛视网膜血管内皮细胞增殖的影响中文摘要研究背景及目的糖尿病视网膜病变（DR）作为糖尿病的严重并发症之一，造成严重的视力损害已引起广泛关注。本研究通过体外选择性培养牛视网膜血管内皮细胞(BREC)，探讨高糖环境对其的影响，并观察3-氨基苯甲酰胺（3-AB）对体外培养的高糖条件下的BREC生长及细胞增殖的影响，为糖尿病视网膜病变的治疗提供理论依据及治疗线索。方法①体外分离牛视网膜组织，结合选择性培养基的使用等方法选择性培养牛视网膜血管内皮细胞，VonWillebrand因子免疫组化鉴定，观察其形态学特点并制作生长曲线。②将传代后的

6、细胞设为不同浓度梯度的葡萄糖和甘露醇对照组，以及空白对照组。四唑盐比色法描绘各干预组及对照组BREC的生长情况，流式细胞仪观察各种不同葡萄糖浓度对BREC影响。③分为低糖对照组、高糖对照组（30mmol/L）、高糖（30mmol/L）+不同浓度3-AB组（0.05mmol/L，0.1mmol/L，0.25mmol/L，0.5mmol/L，0.75mmol/L，1mmol/L），用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测BREC的增殖。采用流式细胞分析技术观察不同浓度3-AB对高糖环境中培养的BREC的凋亡的影响。结果①选择性培养的BR

7、EC能够连续传代，且纯度达到98%以上，对VonWillebrand因子抗体染色阳性，BREC融合后呈铺路石样单层生长，有接触抑制。其生长曲线显示该细胞在传代后的第3～4d进入对数期增殖，到第10～12d进入平台期。②葡萄糖浓度在10mmol/L到25mmol/L之间时，四唑盐比色实验显示对细胞增殖有促进作用；葡萄糖浓度>30mmol/L时，四唑盐比色实验显示抑制细胞增殖，同时，流式细胞分析在细胞周期的凋亡峰增加。③MTT比色法显示，一3定浓度的3-AB可以降低高糖对BREC生长的抑制作用。在浓度为0.25mmol/L时OD值差

8、异有统计学意义（P<0.01）。流式细胞分析技术显示，0.25mmol/L的3-AB可明显减少BREC的凋亡。结论①选择性培养方法的应用可获得较高纯度的BREC，简单且重复性好，无需额外除杂步骤。②葡萄糖在一定浓度时促进牛视网膜血管内皮细胞增殖，在一定的高浓度时