caveolin-1调控表皮生长因子受体活化抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

《caveolin-1调控表皮生长因子受体活化抑制乳腺癌细胞增殖及迁移》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中文摘要Caveolin．1调控表皮生长因子受体活化抑制乳腺癌细胞的增殖及迁移摘要目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率已跃居女性恶性肿瘤的第一位。最新统计报告显示，全球乳腺癌的发病率和死亡率逐渐上升，年死亡人数大约40万人。因此，进一步研究乳腺癌的发生、发展机制具有重要意义。表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)属于酪氨酸激酶受体(receptortyrosinekinase，RTK)家族，包括erbB一1／EGFR、erbB．2／HER．2、erbB．3和erbB一4四个成员，其在细胞的增殖、分化、迁移和存活中发

2、挥重要作用，它们的调控异常与肿瘤的发生、发展有密切的关系。已有报道，HER．2基因扩增和／或蛋白过度表达与乳腺癌的增殖和浸润密切相关，目前已经公认HER．2表达与否是判断乳腺癌预后的一个重要指标。HER．2形成二聚体后，分子中酪氨酸磷酸化可使受体活化，进而激活细胞内一系列信号转导通路，参与肿瘤细胞的增殖和分化等。目前针对HER．2的分子靶向药物已经用于临床治疗乳腺癌，但其单独应用有效率非常低，提示在HER．2过表达的乳腺癌中可能还有其它的分子在HER．2启动的致癌信号通路中发挥重要作用。因此，探索更为有效的乳腺癌治疗新靶点具有重要的意义。有研究发现EGFR也是一种与乳腺癌

3、预后不良相关的标志性分子。EGFR在大约35％～50％的乳腺癌组织中过表达，在三阴性乳腺癌(triplenegativebreastcancers，TNBC)中的表达率约为60％。当EGF与EGFR结合后，通过受体二聚体化和相互磷酸化激活受体蛋白激酶，导致胞内酪氨酸激酶区域上的酪氨酸磷酸化，进而激活ME舳RK及其下游信号传导通路，促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。通过阻断EGFR启动的信号通路将有助于抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。小凹蛋白．1(caveolin．1)是膜内陷囊泡(caveolae)的标志性结构蛋白，它广泛参与细胞的多种生命活动，主要通过磷酸化／去磷酸化途径与

4、多种信号分子相互作用，调控细胞的转化、增殖、迁移和浸润等。已有研中文摘要究证明，Caveolin．1可直接与EGFR结合并抑制其磷酸化。是否Caveolin．1能直接与HER-2结合并抑制其磷酸化?目前尚未见报道。本研究拟在培养的乳腺癌细胞中，进一步探讨Caveolin．1调控EGFR、HER-2磷酸化(活化)及其下游信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响。方法：l细胞培养用含有10％胎牛血清(FBS)、青霉素100IU／ml、链霉素100IU／ml的1640培养基，在37℃、5％C02恒温培养箱中培养乳腺癌MDA．MB．453、MDA．MB．436、SI∞R．3细胞。2明胶酶谱

5、法检测不同乳腺癌细胞的侵袭能力培养乳腺癌MDA．MB．453、MDA．MB．436、SKBR．3细胞，24小时内待细胞长满至培养皿的80％．90％，用无胎牛血清的1640培养基饥饿培养24小时，收集上清，应用明胶酶谱法测定不同乳腺癌细胞中MMP2、MMP9蛋白的活性，了解不同乳腺癌细胞的侵袭能力。3细胞划痕修复实验检测不同乳腺癌细胞的迁移能力培养乳腺癌MDA．MB．453、MDA．MB．436、SKBR-3细胞，待贴壁细胞密度为90％左右，饥饿培养细胞4小时，用无菌200ul移液器吸头在培养皿底部划一条直线，分别于6小时和12小时后观察划痕愈合宽度的变化，计算细胞迁移率。

6、4WesternBlot检测不同乳腺癌细胞Caveolin．1、EGFR、HER．2蛋白的表达培养乳腺癌MDA．MB．453、MDA．MB．436、SKBR．3细胞，待细胞长满至培养皿的80％左右，用无胎牛血清的1640培养基饥饿培养4小时，收集细胞提取总蛋白，采用免疫印迹(WesternBlot)法测定不同乳腺癌细胞中Caveolin．1、EGFR、HER．2蛋白的表达情况。5激光共聚焦显微镜观察Caveolin．1和EGFR在乳腺癌细胞中的定位培养乳腺癌MDA．MB．436细胞，用带有红色荧光羊抗鼠IgG和绿色荧光羊抗兔IgG的荧光二抗，进行免疫细胞荧光染色，激光共聚

7、焦显微镜下观察Caveolin．1和EGFR蛋白在乳腺癌MDA．MB．436细胞中的定位。6沉默或过表达Caveolin．1对乳腺癌细胞EGFR、HER．2、ERK磷酸化水平的影响中文摘要培养乳腺癌MDA．MB．453、SKBR．3、MDA．MB．436细胞，用Lipofectamine2000进行Caveolin．1pcDNA或Caveolin．1siRNA质粒转染，观察Caveolin．1过表达或沉默Caveolin．1对乳腺癌细胞表皮生长因子受体磷酸化水平的影响。实验分组：乳腺癌MDA．MB．453、SKBR．3细胞分为