探讨肺康饮含药血清对人肺癌细胞.doc.doc

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1、文章来源毕业论文网www.biyelunwen.com.cn探讨肺康饮含药血清对人肺癌细胞文章来源毕业论文网www.biyelunwen.com.cn毕业论文  研究表明，目前许多抗药物的抗肿瘤作用可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的［4］。药物对肿瘤治疗的1个重要途径就是诱导肿瘤细胞凋亡，传统的益气法和活血法在肿瘤的免疫治疗中体现出较好疗效［5］。肺康饮就是我们根据扶正祛邪的治疗原则，在多年临床实践基础上，采用益气养阴、清热解毒法研制而成的。经临床观察应用，对于中晚期非小细胞肺癌患者有1定疗效

2、，可降低化疗对患者免疫功能的影响，改善患者的生活质量［2］。最近10年来，肺癌的发病率逐年上升，尽管治疗方法不断改进，但5年生存率不足14%［1］。肺癌严重危害着人类身体健康，其发病率高，病死率高，目前临床尚无理想的治疗方法。临床研究表明，中药组方在治疗肺癌方面取得了较好的疗效，中医药是肺癌综合治疗的重要手段之1。肺康饮是由竹叶、桑叶等数味中药组成的中药复方，经临床观察对肺癌患者有1定的疗效［2］，但作用机制还不清楚。为此，本研究采用中药血清药理学方法孵育人肺癌NC-H446细胞株，以细胞生长抑制率及凋亡率为观

3、察指标，以期深入探讨肺康饮抗肺癌的作用机制。   1 材料与方法   1.1 人肺癌细胞系   人非小细胞肺癌NC-H446细胞株由中国医科大学细胞室提供，我院实验中心细胞室保存。   1.2 主要试剂   RPMI1640培养液、胎牛血清为GIBCO公司产品；噻唑蓝（MTT）及2甲基亚砜（DMSO）为BBI公司产品；AnnexinV

4、细胞凋亡试剂（北京宝赛公司）。   1.3 主要仪器   美国SHELLAB2300型CO2细胞培养箱；日本Nikon倒置相差显微镜；美国Sfat自动酶标分析仪；美国FACScan流式细胞仪等。   1.4 实验方法   1.4.1 文章来源毕业论文网www.biyelunwen.com.cn肺康饮含药血清的制备   肺康饮由竹叶、桑

5、叶等数味中药组成。传统方法煎制，浓缩为100%。按照文献方法［2］按成人用量定容为65mL/d计算，按成人65kg体重剂量的10倍灌胃，即每100g大鼠灌1mL药汁，对照组给予相同剂量生理盐水。给药3d，末次给药后1～2h无菌条件下自心脏取血，离心分离血清，56℃水浴，30min灭活，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，-20℃保存备用。   1.4.2 分组与药物血清添加   分为正常血清对照组，肺康饮低剂量（5%）血清组、肺康饮中剂量（10

6、%）血清组、肺康饮高剂量（15%）血清组。参照文献方法［2］制备药物血清温育液：①药物血清组：临用前将用药组大鼠血清加入RPMI1640培养液，浓度分别为5%、10%、15%。②对照组：对照组大鼠血清加入RPMI1640培养液，浓度10%。   1.4.3 细胞培养   将NC-H446细胞株常规培养于含10%热灭活小牛血清的RPMI1640培养液（含青链霉素各100IU/mL）中，于37℃、5%CO2培养箱内连续培养。  

7、; 1.4.4 肺康饮含药血清对NC-H446细胞增殖的影响   取对数生长期的NC-H446细胞株以1.50×106个/mL的细胞浓度接种于96孔培养板内，每孔体积200μL,在37℃、5%CO2培养箱内培养24h换液。采用直接加入法，分别加入不同浓度（5%、10%、15%）的含药血清和对照血清。每组设4个复孔。继续培养24h、48h后，培养板每孔加入50μLMTT（2mg/mL），同样条件继续孵育4h，吸弃上清，每孔加入100μL2甲基哑砜（DMSO）振荡混

8、匀，于酶标492nm测定各孔的吸光度OD值，计算相应的细胞抑制率：   抑制率（%）=（1-OD实验组/OD对照组）×100%   1.4.5 肺康饮含药血清诱导肺癌细胞凋亡表达的测定   将传代的NC-H446细胞接种于100mL培养瓶中，以含10%热灭活小牛血清的RPMI1640培养