肺康饮含药血清诱导肺癌细胞凋亡的实验研究

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1、肺康饮含药血清诱导肺癌细胞凋亡的实验研究【摘要】目的：探讨肺康饮含药血清对人肺癌细胞（NC-H446）的作用。方法:采用血清药理学方法，以细胞增殖抑制率及凋亡率为观察指标，对实验结果进行分析。结果:肺康饮含药血清培养24h、48h，均对NC-H446细胞株增殖具有抑制作用，且对NC-H446细胞株增殖的抑制作用具有一定的量效及时效关系，实验组与对照组间差异有统计学意义（P<0.01）。各实验组含药血清均可诱导NC-H446细胞株发生凋亡，且该作用具有一定的量效及时效关系，实验组与对照组间差异有统计学意义（P<0.01）。结论:肺康饮含药血清可明显抑制NC-

2、H446细胞株的增殖，抑制作用具有一定的量效及时效关系。肺康饮含药血清也可诱导NC-H446细胞株发生凋亡，作用具有一定的量效及时效关系。【关键词】肺康饮；肺肿瘤；细胞凋亡；流式细胞术【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatethemechanismofauti-tumoreffectsofFEikangyincontainingserumonHumanNC-H446cells.Methods:BythebloodserumPharmacologicalmethodandtakingthesuppressionrateofcellmultipl

3、icationandtherateofapoptosisastheobservationtarget,theexperimentalresultultiplicationandtheinhibitoryactiontotheNC-H446cellstrainmultiplication,(andalso)hadcertainquantityandtimeeffectivenessrelationship.Thedifferencebetentalandcontrolgrouphadstatisticsignificance(P<0.01).Eachexperim

4、entalgroupcontainingserumcouldinduceNC-H446cellstrainapoptosisandthisfunctionhadcertainquantityandtimeeffectivenessrelationship;thedifferencebetentalgroupandthecontrolgrouphadstatisticsignificance(P<0.01).Conclusion:FeikangyincontainingserumobviouslysuppressesNC-H446cellstrainmultipl

5、icationandtheinhibitoryactionhadcertainquantityandtimeeffectivenessrelationship.AndalsoitcaninduceNC-H446cellstrainapoptosisandthisfunctionhasthecertainquantityandtimeeffectivenessrelationship.【KEYI1640培养液、胎牛血清为GIBCO公司产品；噻唑蓝（MTT）及二甲基亚砜（DMSO）为BBI公司产品；AnnexinV细胞凋亡试剂（北京宝赛公司）。1.3主要仪器美国SHELL

6、AB2300型CO2细胞培养箱；日本Nikon倒置相差显微镜；美国Sfat自动酶标分析仪；美国FACScan流式细胞仪等。1.4实验方法1.4.1肺康饮含药血清的制备肺康饮由竹叶、桑叶等数味中药组成。传统方法煎制，浓缩为100%。按照1.4.5肺康饮含药血清诱导肺癌细胞凋亡表达的测定将传代的NC-H446细胞接种于100mL培养瓶中，以含10%热灭活小牛血清的RPMI1640培养液置37℃、5%CO2孵育箱中培养；培养24h至对数生长期，弃培养液，分别加入含有不同浓度（5%、10%、15%）的含药血清及对照组血清的培养液各4mL，置培养箱中培养48h。收集48h含药血

7、清培养的NC-H446细胞培养液，胰酶消化，PBS洗涤3次，置入10mL离心管中离心，4℃、1000rmp、10min，弃上清；加入70%乙醇4℃固定24h以上；上机前离心去除乙醇固定液，PBS清洗2次，加入100μL含钙PBS静置10min，加5μLAnnexinV，10μLPI，避光反应15min，上机检测，以不含药血清处理的NC-H446细胞为阴性对照，计算相应阳性细胞表达率。1.5统计学方法采用多因素方差分析法检测组间差异的显著性。所有统计学检验均应用SPSS11.5统计软件进行。2结果2.1肺康饮含药血清对NC-H446细胞增殖的影响不同浓