小花棘豆生物碱对小白鼠免疫功能及α-甘露糖苷酶基因表达影响

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1、摘要研究小花棘豆的中毒机理，用索氏提取法从小花棘豆中提取出了苦马豆素（SW）和喹诺里西啶类生物碱，并通过气相色谱仪鉴定了SW的纯度，用SW、喹诺里西啶类生物碱及两类生物碱的混合物对小白鼠进行攻毒，通过临床症状观察，免疫器官脏器指数检查，血液常规指标检查（红细胞、白细胞、粒细胞、淋巴细胞、血红蛋白），＋＋病理组织学观察，淋巴细胞增殖功能、T淋巴细胞亚群CD4、CD8表达率及++CD4/CD8比值的测定，血清α-甘露糖苷酶活性及肝脏α-甘露糖苷酶基因相对表达量的测定，综合评价小花棘豆的中毒机理，获得如下结果：（1）通过索氏提取法从小花棘豆中提取出了SW和喹诺里西啶类生物碱

2、，得到1.47gSW的结晶，经过气相色谱检测结晶中SW的含量为96.25%，可供试验使用。（2）给小鼠灌服不同剂量SW、喹诺里西啶类生物碱及其混合生物碱，低剂量的SW能够不同程度的提高小白鼠外周血液中红细胞、白细胞、粒细胞、淋巴细胞数目及血红蛋白的含量，高剂量的SW和喹诺里西啶类生物碱能够显著的降低这些细胞的数目。病理组织学检查发现，各生物碱组小白鼠的肝脏、脾脏、脑、肾脏均出现了不同程度的病变。＋＋（3）低剂量的SW能够提高动物机体T淋巴细胞的增殖和CD4/CD8的比值，＋＋中剂量和高剂量的SW能够严重降低T淋巴细胞的增殖和CD4/CD8的比值；低剂量＋＋的喹诺里西啶

3、生物碱几乎不影响T淋巴细胞的增殖和CD4/CD8的比值，而中剂量和＋＋高剂量的喹诺里西啶生物碱也能够严重降低T淋巴细胞的增殖和CD4/CD8的比值。（4）低剂量的SW能够使小白鼠血清中α-甘露糖苷酶的活性显著升高，高剂量时又能显著的降低血清中α-甘露糖苷酶的活性；喹诺里西啶生物碱对血清中α-甘露糖苷酶的活性不产生影响。（5）低剂量的SW能够升高小白鼠肝脏α-甘露糖苷酶基因的相对表达量，而高剂量SW又能显著的降低其相对表达量；喹诺里西啶类生物碱对肝脏α-甘露糖苷酶基因的相对表达量不产生影响。关键词：小花棘豆；生物碱；免疫功能；α-甘露糖苷酶InfluenceonImmu

4、neFunctioninmiceandalpha-mannosidasegeneexpressionwithAlkaloidsofOxytropisAbstractTheaimofthisstudywastodiscussthetoxicatedmechanismofocytropisglabra.Soxhletextractionextractedswainsonine（SW）andquinolizidinealkaloidsfromOxytropisglabra,andgaschromatographyidentifiedthepurityoftheSW.SW,q

5、uinolonealkaloidsandthemixtureofthesetwotypesofalkaloidsattackeddrugonmice.Bytheobservationofclinicalsymptoms,theexaminationofimmuneorganvisceraindexesandbloodroutineindexesincludingredbloodcells,whitebloodcells,granulocytes,lymphocytes,hemoglobin,theobservationofhistopathology,thefunct

6、ionoflymphopoiesis,the++expressionrateofCD4andCD8inTlymphocytessubgroup,thedeterminationof++CD4/CD8ratioandserumalpha-mannosidaseactivity,therelativeexpressionquantityofα-mannosidaseganeinliverandtheoverallmeritoftoxicatedmechanismofocytropisglabra,theresultswereasfollows:(1)SWandquinol

7、izidinealkaloidswereextractedfromoxytropisglabrabysoxhletextraction,andtheSWcrystallizationwhichcontained96.25%SWaftergaschromatographyandcouldbeusedinexperimentswas1.47g.(2)MiceweredrencheddifferentdosesofSW,quinolizidinealkaloidsandtheirmixedalkaloids.Low-doseSWcouldimproveth