γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡免疫功能及细胞凋亡相关基因表达的影响

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1、河南农业大学硕士学位论文γ--氨基丁酸对断喙后雏鸡免疫功能及细胞凋亡相关基因表达的影响姓名：谢婉莹申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：康相涛201205河南农业大学2012届硕士研究生毕业论文摘要为研究丫-氨基丁酸(GABA)对断喙应激条件下雏鸡免疫功能及其脾脏肿瘤坏死因子．伍(Tumornecrosisfactor-a，TNF-a)、白细胞介素．1p(Interleukin．1D，／L—lZ)、白细胞介素．6(Interleukin．6，1L一6)和细胞凋亡相关基因BcL2、Fa

2、s基因mRNA表达量的影响，进行如下试验，旨在探索缓解断喙应激的方法。试验设计选取1日龄体重均匀的健康固始鸡公雏360只，随机分为A、B、C、D、E5个组，每组6个重复。其中A、B、C为断喙组，饮水中分别添加40mg／kg、．60mg／kg和80mg／kg水平GABA；D组不断喙，不添加GABA；E组断喙，不添加GABA。7日龄断喙，于断喙后1d、3d、5d、7d心脏采血，处死，分离出免疫器官。试验一T一氨基丁酸对断喙后雏鸡免疫功能的影响于断喙后的1d、3d、5d、7d从每个处理每重复取2只鸡，称

3、活体重，心脏采血，分离血清，．20℃保存，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、CD3+、CD4+、IgG、TNF．0【、IL．1断HIL．6血清中的含量；分离免疫器官并称重，计算免疫器官指数。结果表明：断喙对雏鸡造成二定应激，断喙组雏鸡血清ACTH水平明显高于未断喙组，而添=[JI]GABA显著下调雏鸡血清ACTH水平(尸

4、IICD4+水平；不同水平GABA对断喙后雏鸡血清IgG水平无显著影响；断喙应激引起了IL—lB、IL．6ffHTNF．0l血清中含量的升高，断喙后第1、5天血清中IL．1B水平显著高于未断喙组，添加80mg／kgGABA显著降低了血清中IL．1B含量；与未断喙组相比，断喙后第1和7天血清TNF-n和IL．6含量均显著升高，添加80mg／kgGABA后显著降低。试验二Y．氨基丁酸对断喙后雏鸡脾脏细胞因子及细胞凋亡相关基因表达量的影响于免疫后的1d、3d、5d和7d从每个处理每重复取2只鸡，分离脾脏

5、，提取总RNA，反转录出eDNA，用SYBRGreenI做染料，以GAPDH为参照基因，采用实时荧光定量PCR法检测见一J、／L一6和TNF-a的相对表达量以及抗凋亡基因Bcl一2和促凋亡基因Fas的相对表达量。结果表明：断喙后第l、5天，添加80m非gGABA显著降低了儿一邛在脾脏中的表达(P<0．05)；断喙应激造成雏鸡脾脏中TNF-a的表达量显著升高，断喙后第1、5天，添加GABA组脾脏中TNF-a的表达量显著低于断喙未添加GABA组俨<0．05)；此外，断喙后第3天，添加80mg／kgGA

6、BA组雏鸡脾脏中／L．6的表达量显著低于断喙未添加GABA组旧<0．05)；断喙应激后第1、3、7天脾脏中促凋亡基囚鼢mRNA表达量显著高于未断喙组，添加GABA后下降，且随GABA剂量加大而进一步降低，添加80mg&gGABA可轻度上调抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达。关键词：7-氨基丁酸；断喙应激；细胞因子；细胞凋亡相关基因；雏鸡河南农业大学2012届硕士研究生毕业论文AbstractThisexperimentwasundertakentoexaminetheeffectofbeaktrim

7、mingstressonimmunesystemandtheexpressiono．fapoptosis—relatedprotein(FasandBcl-2)inchickspleen，andtoconsiderpossiblerolesofGABAinthisstressresponse．ExperimentaldesignAtotalof360one··day·-oldhealthyGushimalechickswererandomLydividedinto5groups(A，B，C，Dan

8、dE)with6replicationspergroupandsupplementedwithGABAdissolvedindrinkingwateratadoseof0，40，60and80mg／kgforgroupsA(trimmed，40mg／kgGABA)，B(trimmed，60mg／kgGABA)，C(trimmed，80mg／kgGABA)，D(non—trimmed，0mg／kgGABA)andE(trimmed，0mg／kgGABA)respectively．Al